Корм аплаус состав: Корм для кошек Applaws: отзывы, разбор состава, цена

Applaws (Аплаус) беззерновой для кошек «курица и ягненок 80 20%» (dry cat chicken with lamb)

Вся продукция Applaws копании выпускается согласно строгому регламенту качества Великобритании, а каждая партия продукции проходит обязательную проверку и анализы. Рационы Applaws не содержит ГМО, синтетических консервантов или красителей. Не содержит вкусовых добавок.

Ваш питомец будет в восторге при виде аппетитной, изготовленной из самых свежих и качественных ингредиентов продукции Applaws. С появлением Applaws в Вашем доме будет всегда слышно радостное рычание и довольное мурлыканье.

Беззерновая линейка Холистик кормов для кошек Applaws изготовлена по особым рецептам, разработанными диетологами института Великобритании.

Правильная диета очень важна для питомцев, ведь она меняется в зависимости от жизненного цикла. Также полнорационные корма должны включать в себя необходимое количество витаминов и минералов.

В рецептах сухих кормов

Applaws учтен не только перечень наиболее необходимых минералов и витаминов, но и их строгий баланс.

Так как сухой корм изготавливается только из натуральных качественных ингредиентов, крокеты привлекут внимание любого, даже очень привередливого питомца.

Упаковки 0.4, 2 и 7.5 кг с ZIP-замком для сохранения свежести корма.

Состав: дегидрированная курица (48%), дегидрированный ягненок (20%), картофель, куриный фарш (12%), мякоть свеклы, куриный бульон, лососевый жир, витамины и минералы, яичный порошок, клетчатка (0.03%), хлорид натрия, карбонат кальция, сушеные морские водоросли, клюква, DL-Метионин, Хлорид калия, экстракт юкки, экстракт цитрусовых, экстракт розмарина.
Витамины: витамин А (ретинола ацетат) 27,850 МЕ/кг, Витамин Д3 (МЕ/кг): 1,200 МЕ/кг, Витамин Е (альфа токоферол ацетат): 615 МЕ/кг. Микроэлементы: селен (селенит натрия) 0. 13 мг/кг,йод (дегидрированный йодат кальция) 1.5 мг/кг, железо (сульфат железа моногидрат) 80 мг/кг, медь (сульфат меди пентагидрат) 48 мг/кг, Maganese марганец Sulphate Monohydrtate 38 мг/кг,цинк (сульфат цинка моногидрат) 135 мг/кг. Пищевые добавки: E1705 энтерококк 1000000000 cfu. натуральный антиоксидант, смесь токоферолов и экстракт розмарина. Гарантированный анализ (%): Белок: 37, Жир: 17, клетчатка: 2.5, зола: 10.9, Омега-3 : 1.0, Омега-6 fatty acid 3.3, кальций 2.7, фосфор 1.6.

Как выбрать сухой корм для собак?

10.12.2020 Этот вопрос мучает всех владельцев собак. Сталкиваются с ним не только “любители”, но и профессионалы: ветеринары, заводчики и кинологи. Предложений от производителей кормов много, а понять, какой из них лучший и полезный, удается не каждому. На первых порах это может занимать немало времени: нужно определиться с классом, понять, какого эффекта вы ожидаете от сухого корма, разобрать состав и сравнить один корм с другим. Иногда выбрать сухой корм для собаки тяжело, но это того стоит. Так как в будущем вам не придется тратить время на выбор, вы уже не задумываясь будете заказывать новую упаковку любимого корма для вашего четвероногого друга.

А стоит ли заморачиваться по поводу корма?

Конечно. Даже если ваш питомец не имеет какие-либо аллергии или физиологические особенности, неправильная диета или питание могут спровоцировать развитие заболеваний. Высокая вероятность того, что даже за несколько лет вы не заметите разницу в самочувствии собаки. Но в один момент проблема может обнаружиться. И это не стоит ваших нервов и дискомфорта вашего любимца.

Например, в составе корма эконом-класса присутствуют компоненты, которые плохо усваиваются в организме, что может привести к расстройству ЖКТ или другим неприятным последствиям.

Как выбрать сухой корм?

Для начала нужно понять, для кого вы ищете корм. Корм для мелких собак премиум-класса или гипоаллергенный корм.

Самое главное — учитывать не только породу вашего четвероногого друга, но и его вес, возраст, размер и заболевания. Далее вы уже должны ориентироваться на свои финансовые возможности. Так как действительно хороший и качественный корм будет стоить недешево.

Поэтому перед тем, как купить сухой корм для собаки, нужно определиться с этими параметрами:

1. Основной или лечебный корм
2. Порода собаки
3. Размер
4. Вес
5. Возраст
6. Образ жизни

7. Класс корма

Основной и лечебный корм

Основной корм предназначен для повседневного употребления для собак без заболеваний и различных физиологических особенностей. В его состав входит стандартный набор компонентов, который подходит большинству питомцев. Что касается лечебного корма, то здесь важно знать, чем точно болеет ваш пес. Лучше всего заранее проконсультироваться с ветеринаром. В данном виде сухих кормов соблюдаются точные дозировки всего, что входит в состав. Либо некоторые позиции состава сухого корма могут быть заменены.

Например, гипоаллергенный корм для собак не имеет в своем составе злаков. Они заменены на рис и овощи. Также производители гипоаллергенных кормов увеличивают процент аминокислот и пробиотиков. Таким образом иммунитет вашего питомца укрепляется, а здоровье улучшается.

Гипоаллергенный сухой корм можно найти в линейках таких брендов, как:
● Pro Plan (Про План)
● Hill’s (Хиллс)

Порода собаки

Почему порода имеет значение? На генетическом уровне каждая порода собак отличается друг от друга. А это значит, что предрасположенность к лишнему весу или заболеванию у кого-то будет выше. При создании корма учитывают характеристики и генетику каждой породы. На основе этих данных и формируется состав. Корм для мелких пород собак отличается не только по начинке, но и по размеру самих гранул или подушечек. Для большой собаки не составит труда раскусить гранулы любого размера, а вот у мелких собак это может привести к проблемам с зубами.

Какие изменения в составе? Если пес имеет склонность к набору лишнего веса, производитель уменьшает калорийность корма. Поэтому ваш любимец не превратится в колобка, если съест немного больше обычного.

Размер

Как мы уже написали выше, корм для мелких собак отличается от корма для больших. Но помимо отличия в размере гранул, существуют также особенности в составе сухого корма. Большим собакам требуется больше кальция, чем мелким. Этот пункт не критичен, если вы являетесь владельцем собаки средних размеров.

Вес

Даже если у вашего любимца не наблюдается избыточный вес, данный параметр следует учитывать. Вы замечали таблицу на обратной стороне упаковки сухого корма? Соотношение порции и веса собаки. Она там не просто так. Опираясь на вес питомца, вы с легкостью узнаете, сколько корма нужно давать вашей собачке.

Обращаем ваше внимание на то, что у каждого производителя разные соотношения. Все потому что какой-то корм может быть более калорийным и меньшей порции хватит для питательного приема пищи.

Как взвесить собаку? Если у вас собака небольших размеров, то вам, можно сказать, повезло. Встаньте на весы и возьмите на руки своего четвероного друга, потом взвесьтесь сами. От первого замера отнимите второй и вы узнаете вес питомца.

Если вы обладатель большой собаки, лучше сделать замер на приеме у ветеринара.

Возраст

Нельзя сказать, что какой-то из периодов жизни собак особенно сильно нуждается во внимании. На каждом этапе нужно внимательно относиться к подбору корма. Щенки нуждаются в большом количестве витаминов, так как их организм все-ещё формируется. У них растут зубы, формируется и укрепляется скелет и мускулатура. При неправильном выборе корма питомец может пострадать и жить с недугами всю оставшуюся жизнь.

Образ жизни

Питание собаки, которая живет на улице в будке, также отличается от рациона собаки, живущей в доме. Потому что с приходом холодов собакам в будках нужно дополнительное количество калорий в корме.

Так они не замерзнут. Домашние питомцы не нуждаются в этом, так как в помещении тепло.

Образ жизни еще и касается характера собаки. Если у вас активная и игривая собака, ей нужно черпать энергию из питания. Если она любит поспать и неохотно играет с вами, лишние калории ей не нужны.

Для беременных собак лучше выбирать корм для щенят. Большое количество витаминов и протеина не даст ее организму ослабнуть. Переводить на сухой корм нужно в течение 7-10 дней, чтобы предотвратить расстройство желудка.

Классы сухих кормов для собак

Выделяют 4 класса:

1. Эконом-класс
2. Премиум-класс
3. Супер-премиум класс
4. Холистик
Критериями разделения кормов на данные классы являются: количество мяса в составе, цена, витаминное соотношение и качество всех компонентов.

Самый разрекламированные и доступный — эконом-класс. Цена ниже, чем у трех остальных, но и качество хуже. Сухой корм эконом-класса не может использоваться в качестве основного рациона. В составе таких сухих кормов преобладают злаковые и субпродукты, а не мясо. А это значит, что протеина в корме недостаточно.

Какие бренды входят в эконом-класс?

● Chappi (Чаппи)
● Pedigree (Педигри)
● Darling (Дарлинг)

Фаворитом большинства хозяев долгое время остается

сухой корм премиум-класса. Заслужил свое признание он благодаря соотношению “цена-качество”: по составу он лучше эконома, а по цене не такой дорогой, как супер-премиум или холистик.

Корм для собак премиум класса содержит больше белка, но включает субпродукты. Комплекс, состоящий из витаминов, макро и микроэлементов, хорошо сбалансирован. Но в таком сухом корме все еще присутствуют красители и ароматизаторы.

Какие бренды входят в премиум-класс?

● Brit (Брит)
● Hill’s (Хиллс)
● Royal Canin (Роял Канин)
● Pro Plan (Про План)

Сухой корм супер-премиум класса считается элитным.

И не зря. На первом месте в составе стоит качественное мясо (курица, цыпленок, ягненок, индейка), далее идут субпродукты 1-й категории, то есть хорошие, и рис, который отлично усваивается в организме собаки.
В данном классе присутствуют лечебные и диетические корма, так как процесс производства позволяет включать в корм продукты высочайшего качества и следовать установленным дозировкам. Гипоаллергенный корм для собак также входит в состав супер-премиум класса.

Какие бренды входят в супер-премиум класс?

● Unica Natura (Уника Натура)
● Gina (Джина)
● Porcelan (Порцелан)
● Brit Care (Брит Кеа)
● Barking Heads (Баркинг Хэдс)

Класс холистик максимально приближен к естественному рациону питомца. Такой сухой корм содержит от 75% до 80% мяса. Различная “химия”, ароматизаторы и вкусовые добавки отсутствуют. Холистик любят профессиональные заводчики собак и простые хозяева, которым очень важно, чтобы их питомец получал только все самое лучшее.

Единственный минус такого сухого корма — высокая цена. Но и она оправдана тем, что собака, которая питается сухим кормом холистик, практически неуязвима перед заболеваниями на протяжении всей своей жизни.

Какие бренды входят в класс холистик?

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws набор ламистеров для взрослых собак с курицей, ягненком и лососем 5 шт х 150 гр (1 уп)

Набор аппетитных паштетов для взрослых собак с курицей, ягненком и лососем.

712 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws Паштет для собак с лососем и овощами (150 г)

Нежный паштет Applaws — это полнорационная порция мясного/рыбного мусса с добавлением всех необходимых для собаки витаминов и минералов. Упаковка в виде алюминиевого контейнера прекрасно сохраняет качество ингредиентов и его непревзойденный вкус. Состав: Курица 27%, Свинина 19%, Молодая морковь 8%, Зеленый горошек 8%, Лосось 4%, Форель 4%. Пищевые добавки: Витамин Е 30 МЕ/кг, Сульфат меди 1мг/кг, Сульфат цинка 20 мг/кг. Гарантированный анализ: Белки 10%, Жиры 5,5%, Клетчатка 0,2%, Зола 2,3%, Влага 82%.

155 RUR

Monge / / похожие

Подробнее

Monge Fruit Dog для взрослых собак паштет с лососем и грушей (100 гр х 32 шт)

Нежный паштет из кусочков свежего мяса лосося и сочной груши.

2432 RUR

Monge

Monge / / похожие

Подробнее

Applaws для взрослых кошек с кусочками тунца и лососем в желе (70 гр х 16 шт)

Нежные кусочки тунца с лососем в аппетитном желе для взрослых кошек – побалуйте своего питомца вкуснейшим обедом!

1922 RUR

Набор аппетитных паштетов для взрослых собак с курицей, ягненком и лососем.

712 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws для взрослых собак паштет с лососем и овощами (150 гр)

Паштет Applaws с лососем и овощами для взрослых собак – побалуйте своего питомца вкуснейшим обедом!

153 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws для взрослых собак паштет с курицей и овощами (150 гр)

Паштет Applaws с курицей и овощами для взрослых собак – побалуйте своего питомца вкуснейшим обедом!

153 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws для взрослых собак с курицей и рисом (156 гр)

Консервы Applaws с курицей и рисом для взрослых собак – побалуйте своего питомца вкусным и полезным обедом!

187 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws для взрослых собак паштет с лососем и овощами (150 гр х 7 шт)

Паштет Applaws с лососем и овощами для взрослых собак – побалуйте своего питомца вкуснейшим обедом!

1032 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws набор ламистеров для взрослых кошек с курицей, ягненком и лососем 7 шт х 100 гр (1 уп)

Набор аппетитных паштетов для взрослых кошек с курицей, ягненком и лососем.

760 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

Applaws для взрослых собак с курицей, овощами и рисом (156 гр х 12 шт)

Консервы Applaws с курицей, овощами и рисом для взрослых собак – побалуйте своего питомца вкусным и полезным обедом!

2136 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

2490 RUR

Applaws

Applaws / / похожие

Подробнее

программ для изучения состава и потока микробных сообществ на основе данных флюоресцентных отпечатков ДНК.

6. Библиография

[1] АВАНИСС-АГАДЖАНИ Э., К. ДЖОНС, А.ХОЛЬЦМАН, Т.АРОНСОН,

Н. ГЛОВЕР, М.БОЯН, С.ФРОМАН, И ЦФБРУНК,

‘ «Молекулярный метод быстрой идентификации

микобактерий», Журнал клинической микробиологии

34, стр. 98-102 (1996).

[2] BRUCE, KD, «Анализ подклассов mer-гена в пределах

бактериальных сообществ в почвах и отложениях, разрешенных с помощью

Флуоресцентный полиморфизм длины фрагмента рестрикции ПЦР

Профилирование», Прикладная и экологическая микробиология 63

, стр.4914-4919 (1997).

[3] ЧИН, К.Дж., Т.Луков, С.СТубнер, Р. Конрад,

«Структура и функция метаногенных архей

Сообщество в стабильном обогащении, разрушающем целлюлозу

Культуры при двух разных температурах (15 и 30 градусов

C) », FEMS Microbiology Ecology 30, стр. 313-326 (1999).

[4] CLEMENT, BG, LE KEHL, KLDEBORD, И CL

KITTS, «Паттерны концевых рестрикционных фрагментов (TRFP),

Быстрый метод на основе ПЦР для сравнения комплекса

бактериальных сообществ» ‘, Журнал микробиологических методов

31, стр.135-142 (1998).

[5] ERB, RWAND I. WAGNERDOBLER, «Обнаружение

генов деградации полихлорированного бифенила в загрязненных

отложениях путем прямой экстракции ДНК и полимеразной цепи —

реакция», Прикладная и экологическая микробиология

. 4065-4073 (1993).

[6] ЭТЦОЛД, Т., А. УЛЬЯНОВ, П. АРГОС, «SRS: информационная

поисковая система для банков данных молекулярной биологии», Компьютер

Методы анализа макромолекулярных последовательностей, изд.Рассел Ф.

Дулиттл, стр. 114-128, Academic Press (1996).

[7] ДЖОВАННОНИ, С.Дж., Т.

[8] HEAD, I.M., J. R. SAUNDERS, R. W.PICKUP, «Microbial

Evolution, Diversity and Ecology: A Decade of Ribosomal

RNAAnalysis of Nonculultural Microorganisms», Microbial

Ecology 35, pp. 1-21 (1998).

[9] HERMJAKOB, HENNING, ROBERT GIEGERICH, AND WALTER

ARNOLD, «Винтовка: быстрая идентификация микроорганизмов по оценке длины фрагмента

», Пятая международная конференция

по интеллектуальным системам для молекулярной биологии.

Греция, изд. Терри Гаастерленд, Питер Карп, Кевин Карплюс,

Христос Узунис, Крис Сандер и Альфонсо

Валенсия, стр. 131-139, AAAI Press (21-26 июня 1997 г.).

[10] HORZ, H.P., J.H. ROTTHAUWE, T.LUKOW, AND W. LIESACK,

«Идентификация основных подгрупп окисляющих аммиак

бактерий в пробах окружающей среды с помощью анализа T-RFLP

продуктов ПЦР amoA», Журнал микробиологических методов

39, стр. 197-204 (2000).

[11] LIU, WT, TLMARSH, H.CHENG, И LJ FORNEY,

» Характеристика микробного разнообразия путем определения

Полиморфизмы длины конечных рестрикционных фрагментов

генов, кодирующих 16S рРНК », прикладные и экологические

Микробиология 63, стр.4516-4522 (1997).

[12] МАРШ, Т.Л., У.Т.ЛИУ, Л.Дж. Форни и Х. ЧЭНГ,

«Начало молекулярного анализа эукариального сообщества

в активном иле», Water Science and Technology

37, стр. 455-460 (1998).

[13] НОГАЛ, БАЛБИНА, ЭДВАРД РБ МУР, ВОЛЬФ-РЕЙНЕР

Абрахам, Кеннет Н. ТИММИС, «Идентификация

метаболически активных членов бактериального сообщества в загрязненном бифенилином полихолорине

. »,

Экологическая микробиология 1, стр.199-212 (1999).

[14] OSBORN, AM, ERB MOORE, AND KN TIMMIS, «Оценка длины концевого ограничивающего фрагмента

Анализ полиморфизма

(T-RFLP) для изучения микробной структуры и динамики»

, Экологическая

Микробиология 2, стр. 39-50 (2000).

[15] PAPPIN, D.J.C., P.HOJRUP, AND A.J.BLEASBY, «Rapid

Identification of Proteins by Peptide-Mass Fingerprinting»,

Current Biology 3, pp.327-332 (1993).

[16] SUZUKI, M. , MS RAPPE, AND SJ GIOVANNONI, «Кинетический

Погрешность в оценках прибрежного сообщества пикопланктона

Структура, полученная путем измерения малых субъединиц рРНК

Ген ПЦР, длина гетерогенности, гетерогенность. Applied and

Environmental Microbiology 64, стр. 4522-4529 (1998).

[17] УАЙЗ, МАЙКЛ Дж., Тим Литтлджон, Иэн Хамфери —

СМИТ, «Отпечаток пептидной массы и идеальное покрытие

, набор для характеристики белков», Электрофорез

18 (8), .1399–1409 (1997).

[18] ВИТТЕН, ИЭН Х., АЛИСТЕР МОФФАТ И ТИМОТИ К. БЕЛЛ,

Управление гигабайтами, MorganKaufmann (1999).

[19] ВУ, САН И УДИ МАНБЕР, «Fast TextSearching Allowing

Errors», Communications of ACM 35 (10), pp. 83-91

(октябрь 1992).

-7-

Введение

Популяции микробов, которые населяют среду кишечника, играют важную роль в благополучии хозяина за счет использования питательных веществ, которые иначе не усваиваются хозяином, создавая среду, которая не способствует выживанию патогенов и стимуляция иммунной системы [1].Чтобы понять форму и функции сложных экосистем, необходимо выявить основные движущие силы микробного разнообразия и структуры сообществ [2]. Эволюция изучения микробного разнообразия рубца аналогична изучению других микробных экосистем, переходя от культуральных и микроскопических наблюдений к использованию не зависящих от культуры молекулярных методов. Ген малой субъединицы рибосомной РНК (S рРНК) является наиболее частой мишенью для характеристики бактериального разнообразия в такой среде [3].Использование методов снятия отпечатков пальцев может предоставить полезную информацию о структуре микробиома рубца. Наиболее часто используемые методы в изучении микробной экосистемы рубца — это однонитевой конформационный полиморфизм [4], денатурирующий градиентный гель-электрофорез [5], полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) и его вариант терминального ПДРФ [6]. В этих методах использовались нецелевые подходы для выявления различий и сходств в микробных сообществах в ответ на различия в видах хозяев, рационах и эффективности корма [7], [8], но они не предоставляют прямой информации о последовательности. Несмотря на этот недостаток, продолжают использоваться методы снятия отпечатков пальцев, поскольку они позволяют быстро получить снимок микробиоты. Они могут показать, что существуют различия между различными методами лечения, но их нельзя использовать для идентификации ключевых видов в рамках системного биологического подхода [9].

Развитие технологий секвенирования следующего поколения (NGS) способствовало быстрому росту приложений [10], включая разработки в области скрининга сложных микробных сообществ [11], [12]. В частности, характеристика генных пулов бактериальной 16S рРНК посредством массового параллельного секвенирования ампликонов становится методом выбора, который может заменить ранее использовавшиеся методы секвенирования библиотеки клонов [13] и, возможно, даже методы снятия отпечатков пальцев, такие как T-RFLP.Увеличивающееся количество, качество и длина считываний за цикл, вместе с возможностью «маркировки штрих-кодом» ампликонов с помощью адаптеров для конкретных образцов, позволяющих мультиплексировать образцы [14], предоставляют возможность скрининга нескольких образцов на высокой глубине секвенирования. Однако общая воспроизводимость и надежность NGS, его способность адекватно восстанавливать относительную численность матриц и его сопоставимость с другими методами скрининга, такими как фингерпринт гена рРНК, все еще остаются предметом дискуссий [10].Соответствующая литература продолжает расти и содержит как поддерживающие [15], так и менее поддерживающие аргументы [16] относительно использования NGS в исследованиях микробной экологии. В дополнение к общепринятой потребности в качественной фильтрации, чтобы избежать переоценки разнообразия [16], также были подняты вопросы с технической воспроизводимостью и полуколичественным потенциалом секвенирования пиротагов [17]. Таким образом, методы снятия отпечатков пальцев могут по-прежнему представлять собой приемлемый и недорогой способ изучения микробного разнообразия в сложных экосистемах.В этом исследовании мы оценили использование Ion Torrent PGM NGS в качестве альтернативы методам снятия отпечатков пальцев для изучения микробного разнообразия в среде кишечника путем секвенирования области V3 гена 16S рРНК и сравнения результатов с результатами, полученными с помощью исследования отпечатков пальцев на концах ПДРФ. того же гена (16S рРНК). Чтобы установить надежное сравнение, мы использовали ДНК 8 животных в трех разных состояниях простейшей колонизации рубца. Простейшие в рубце не являются необходимыми для функции рубца, но могут существенно влиять на ферментацию рубца и питание хозяина [18], поэтому прогрессирующая колонизация простейшими в рубце служила мощной моделью для оценки изменений микробиома рубца овец.

Методы Описание дизайна эксперимента, процедура колонизации и сбор образцов рубца

Все процедуры на животных проводились в соответствии с Законом о животных (научные процедуры) 1986 года (PLL 40/316; PIL 40/9798) в соответствии с руководящими принципами Европейской директивы 2010 / 63 / EU и после одобрения внутренней этической комиссией Университета Аберистуита. Восемь половозрелых овец тексельского кросса, свободных от простейших, выделенных от фаунированных овец при рождении [19] и в возрасте приблизительно 4 лет в начале эксперимента, использовали в эксперименте с тремя последовательными периодами с 3-месячной фазой адаптации между каждым периодом.В течение первого периода (P1) животные оставались без фауны; во второй период (P2) их инокулировали смешанной голотриховой популяцией (виды Isotricha Кишечник, Isotricha prostoma и Dasytricha ruminantium), полученной из криоконсервированных образцов от монофаунированных овец. Холотрих простейшие инокулировали пероральным введением 50 мл смеси голотриховых простейших, разведенных в растворе типа симплекс Коулмана [20]. В течение третьего периода (P3) животным прививали рубцовую жидкость, полученную от контрольных животных (с естественной популяцией простейших, состоящей из подсемейств Entodiniinae (87%) и Diplodiniinae (2.5%), Epidinium sp. (7%), Isotricha sp. (0,5%) и Dasytricha sp. (2%)). В течение последнего месяца каждого периода овец содержали в индивидуальных загонах со свободным доступом к пресной воде и минеральным блокам и кормили экспериментальным рационом, состоящим из 67% сена из райграса и 33% молотого ячменя, чтобы удовлетворить потребности в содержании в 1,5 раза [21]. Диета распределялась на два равных приема пищи в день (09:00 и 19:00). В конце каждого периода перед утренним кормлением через пищеводную трубку получали жидкость из рубца (около 350 мл на животное).Затем жидкость из рубца фильтровали через нейлоновую сетку с размером пор 250 мкм ² и регистрировали pH.

Биохимический анализ и подсчет простейших.

образцов жидкости рубца добавляли к 20% ортофосфорной кислоте (содержащей 20 мМ 2-этилмасляной кислоты в качестве внутреннего стандарта, 1 мл кислоты / 4 мл жидкости рубца) для депротеинизации образцов. Анализ SCFA (ацетатная (C2), пропионатная (C3) и N-бутиратная (C4) кислоты) проводился после осаждения в течение 24 часов перед фильтрованием через Cronus 0,45 мкм ² 25 мм нейлоновый шприц-фильтр с фильтром предварительной очистки в стеклянный флакон и закрыты.КЦЖК определяли с помощью газожидкостной хроматографии с использованием 2-этилмасляной кислоты в качестве внутреннего стандарта, как описано в [22]. Концентрацию аммиака (Nh4) определяли фенольным методом Уайтхеда [23].

Общее количество простейших было определено количественно с помощью оптического микроскопа с использованием процедуры, описанной Dehority [24] и адаптированной de la Fuente et al. [25]. Концентрации Isotricha sp. и Dasytricha sp. были рассчитаны как представитель голотриховых простейших и подсемейства Entodiniinae, подсемейства Diplodiniinae и Epidinium sp., как представитель энтодиниоморфидных простейших.

Молекулярный анализ Экстракция ДНК.

Образцы жидкости рубца хранили на льду до замораживания при -80 ° C перед сушкой вымораживанием. Перед экстракцией нуклеиновых кислот лиофилизированные образцы разрушали взбиванием шариков. Лиофилизированные образцы (100 мг) добавляли в пробирку с завинчивающейся крышкой объемом 2 мл с добавлением одной автоклавированной стеклянной бусины (4 мм, без отверстий, G / 0300/53, Fisher Scientific, Великобритания). Образцы взбивали шариками в течение 90 с при 5000 об / мин в Mini-Beadbeater (Biospec products Inc. , Бартлсвилл, ОК). Затем ДНК экстрагировали с использованием мини-наборов для стула QIAGEN QIAamp DNA (Qiagen Ltd., Великобритания), как описано ранее [26].

Анализ отпечатков пальцев (T-RFLP)

ПЦР выполняли с использованием пары праймеров, специфичных для бактерий, 16S рРНК, меченного цианином 27F (5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTG AG-3 ‘) и немеченого 1389R (5’-AGG GGG GGT GTG TAG AAG-3 ‘) [27] после Skøivanová et al. [26]. Готовили 25 мкл реакционной смеси, содержащей 1,25 ед. ДНК-полимеразы GoTaq (Promega UK Ltd., Саутгемптон, Великобритания), 1 × реакционный буфер Promega, 1.75 мМ MgCl ₂, 0,2 мМ каждого dNTP при 0,5 мкМ каждого праймера. Полученные ампликоны анализировали на 1% (мас. / Об.) Агарозном геле TAE для оценки качества амплификации.

Концентрация

ДНК в каждом амплифицированном и очищенном образце определялась спектрофотометрически (спектрофотометр Nanodrop ND-1000), чтобы обеспечить стандартизованное количество 50 нг ДНК для переваривания рестрикционными ферментами. Переваривание образцов проводили с использованием рестрикционных ферментов HhaI, HaeIII, RsaI и MspI (New England Biolabs UK Ltd.) в соответствии с рекомендациями производителя, за исключением HhaI, где не было рекомендовано добавление бычьего сывороточного альбумина.

Рестрикционные гидролизаты (20 мкл) очищали осаждением этанолом в 96-луночном планшете для ПЦР с термогильзой (Costar; Corning Inc., NY). ДНК осаждали 120 мкл 95% этанола при -80 ° C, 4 мкл EDTA (100 мМ), 4 мкл ацетата натрия (3M, pH 5,2) и 4 мкл гликогена (20 мг / мл) и центрифугировали 30 мин при 4 ° C при 3000 г. Осадки ДНК дважды промывали 200 мкл 70% этанола, сушили на воздухе при комнатной температуре и ресуспендировали в 35 мкл буфера раствора для загрузки образца, включающего стандарт размером 600 п.н. (Beckman Coulter Inc., Фуллертон). T-RF разделяли в системе генетического анализа CEQ 8000 (Beckman Coulter, High Wycombe, UK) с использованием параметров Frag4 (шаг денатурации при 90 ° C в течение 120 секунд; инъекция при 2 кВ в течение 30 секунд; разделение при 4,8 кВ в течение 60 секунд. мин при температуре капилляров 50 ° C). Используемые протокол и программное обеспечение были такими, как описано в [26], с использованием метода Local Southern, чтобы отличить истинные пики от фонового шума. В этом случае перед экспортом данных из системы генетического анализа CEQ 8000 применялись следующие критерии: порог наклона 5 и относительная высота пика 5% (где 5% второго по величине пика использовалось в качестве нижнего порога для идентификации пика) .Эти параметры позволяют обнаруживать и устранять более мелкие, более широкие пики, которые имели бы менее конкретный размер и не свидетельствовали об отдельных истинных OTU.

NGS-анализ

Амплификацию гипервариабельной области V3 16S рРНК проводили с праймерами 341F и 518R [28]. Прямой праймер (5′-CCTACGGGAGGCAGCAG-3 ‘) несет последовательность адаптера A-ключа Ion Torrent Primer (5′-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG-3′), а обратный праймер (5’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3 ‘) несет P1 Torrent Primer -ключевую последовательность адаптера A (5’-CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT-3 ‘), за которой следует последовательность штрих-кода, специфичная для образца из 12 нуклеотидов (таблица S1).Для каждой повторности образца ПЦР выполняли в двух экземплярах; готовили 25 мкл реакции, содержащей 1,25 ед. смеси FastStart High Fidelity Enzyme Blend, 10 × FastStart High Fidelity Buffer с 18 мМ MgCl ₂ (Roche Diagnostics Ltd., Burgess Hill, UK), 0,2 мМ каждого dNTP (Promega UK Ltd ., Саутгемптон, Великобритания), 0,2 мкМ каждого праймера и 1 мкл ДНК-матрицы при 2,5–125 нг / мкл. Использовались следующие условия: горячий старт при 95 ° C в течение 10 минут, 95 ° C в течение 2 минут, затем 22 цикла при 95 ° C в течение 30 секунд, 50 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 30 секунд с заключительным удлинение при 72 ° C в течение 7 мин.Реакции усиливали в термоциклере T100 (Bio-Rad, Hemel Hempstead, UK). Полученные ампликоны визуализировали на 1% (мас. / Об.) Агарозном геле TAE для оценки качества амплификации перед объединением дублирующих реакций.

Объединенные реакции ПЦР для всех повторов образцов очищали в соответствии с техническим бюллетенем Рош 2011-007 (январь 2012 г.) «Процедура удаления коротких фрагментов для процедуры подготовки библиотеки ампликонов» с использованием гранул Agencout AMpure XP (Beckman Coulter Inc., Фуллертон, США).Концентрацию ДНК в очищенных продуктах ПЦР оценивали с помощью спектрофотометра Epoch Microplate с планшетом Take3 Micro-Volume (BioTek UK, Поттон, Великобритания), чтобы обеспечить равномолярное объединение образцов с уникальными последовательностями штрих-кода. Каждую библиотеку дополнительно очищали с использованием системы E-Gel с 2% агарозным гелем E-Gel SizeSelect (Life Technologies Ltd, Пейсли, Великобритания). Очищенные библиотеки оценивали на качество и количественно на биоанализаторе Agilent 2100 с высокочувствительным ДНК-чипом (Agilent Technologies UK Ltd, Стокпорт, Великобритания).Затем библиотеки образцов секвенировали с использованием секвенатора Ion Torrent PGM после набора Ion PGM Template OT2 200 (Life Technologies Ltd, Пейсли, Великобритания).

ПЦР эмульсии проводили с использованием набора Ion PGM Template OT2 200 (Life Technologies), как описано в соответствующем руководстве пользователя (номер по каталогу: 4480974, версия 4.0), предоставленном производителем. Секвенирование библиотек ампликонов выполняли в системе Ion Torrent Personal Genome Machine (PGM) с использованием набора Ion PGM Sequencing 200 Kit v2 (все Life Technologies) по соответствующему протоколу (номер по каталогу: 4482006, редакция 1.0). Необработанные считывания последовательностей всех образцов были депонированы в Архив коротких считываний EBI (SRA) из Европейского архива нуклеотидов (ENA) и доступны под регистрационным номером исследования PRJEB5190.

После секвенирования данные были объединены и идентификационные номера образцов присвоены мультиплексированным операциям считывания с использованием программной среды MOTHUR [29]. Данные были очищены от шума, последовательности низкого качества, ошибки пиросеквенирования и химеры были удалены, затем последовательности были сгруппированы в OTU с 97% идентичностью с использованием конвейера CD-HIT-OTU (доступного по адресу http: // eeizhong-lab. ucsd.edu/cd-hit-otu, [30]). OTU, содержащие менее 10 чтений, были исключены из-за вероятности того, что они являются артефактом секвенирования. Образцы нормализовали путем случайной повторной выборки до наименьшего количества последовательностей на образец (комбинация период / животное) с использованием Daisychopper (www.genomics.ceh.ac.uk/GeneSwytch/). Таксономическая информация о транскриптах 16S рРНК была получена путем сравнения с Ribosomal Database Project-II (RDP) [31]. Этот метод широко используется и обеспечивает быструю таксономическую классификацию от домена до рода как частичных, так и полноразмерных последовательностей гена рРНК.Мы рассматривали только аннотацию со значением начальной загрузки более 0,7, останавливая присвоение на последнем хорошо идентифицированном филогенетическом уровне и оставляя последующие уровни как неклассифицированные.

Статистический анализ

Анализ TRF выполнялся с использованием метрик Минковского, манхэттенских расстояний и метода невзвешенных парных групп со средним арифметическим (UPGMA). UPGMA проводился с использованием Neighbor в пакете Permanova + (версия 1.0.2; primer-E, Ivybridge, UK). Перестановочный многомерный дисперсионный анализ (Permanova) и канонический анализ главных координат (CAP) [32] также были выполнены с использованием Permanova +.В этих анализах использовались манхэттенские расстояния преобразований четвертого корня как данных T-RFLP, так и данных о численности OTU. Permanova и CAP были выполнены с использованием 9999 неограниченных перестановок.

Данные были подготовлены, а таблицы и рисунки составлены с использованием Microsoft Excel и программной среды «R» (версия 2.15; http // www.r-project.org /). Индексы богатства и разнообразия Шеннона-Винера были рассчитаны с использованием нормализованных данных, как рекомендовано для уменьшения чрезмерного увеличения истинного разнообразия в наборах данных пиросеквенирования [33].Затем видовое богатство и разнообразие Шеннона-Винера были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа с использованием корреляции продукта и момента Р. Спирмана, которые были выполнены между параметрами ферментации (pH, NH ₃, C2, C3 и C4) и значениями индексов биоразнообразия из обоих наборов данных ( NGS и T-RFLP). Также был проведен анализ канонического соответствия (CCA), включая параметры ферментации в качестве ограничивающих переменных в модели. CCA, как известно, является полезным инструментом для объяснения структуры многомерной таблицы данных с использованием переменных среды, предполагая одномодальное распределение «видов» (OTU или T-RF) [34].Таким образом, диаграмма ординации представляет не только схему распределения сообществ, но и основные характеристики распределения видов по переменным окружающей среде.

В попытке нормализовать данные использовали преобразование квадратного корня перед анализом влияния колонизации простейшими в рубце на каждую отдельную OTU с помощью ANOVA. Чтобы минимизировать частоту ложных открытий при попарном сравнении, значения P были скорректированы с использованием метода Бенджамини и Хохберга [35], где значимость была установлена на Q <0.1. Кроме того, учитывались только ОТЕ со средней численностью 0,01% или выше.

Результаты Подсчет простейших

Подсчеты общего количества и групп простейших показаны в таблице 1. Простейших не было обнаружено ни у одного из животных из P1. Существенных различий в концентрации простейших между животными за исследуемые периоды не наблюдалось (P> 0,05). Доля простейших в P2 составляла в среднем 23% и 77% Isotricha sp. и Dasytricha sp. соответственно. И Isotricha spp, и Dasytricha sp.численность уменьшилась, когда была установлена полная фауна простейших (таблица 1, P <0,05). Популяция простейших в P3 состояла из 89,3% подсемейства Entodiniinae, 51% подсемейства Diplodiniinae, 2,6% Epidinium sp., 2,4% Daystricha sp. и 0,7% Isotricha sp.

10.1371 / journal.pone.0101435.t001 Таблица 1 Концентрация простейших (log (числа +1) на мл жидкости рубца) у овец, свободных от простейших (P1), фаунированных простейшими голотрихами (P2) или с полной популяцией простейших (P3).

Простейшие	П1	P2	П3	SED	-п.
Isotricha sp	0 ^c	4.02 ^a	3,60 ^б	0,120	<0,001
Дасытрича ИП	0 ^c	4,58 ^a	4,17 ^б	0,086	<0,001
Подф. Entodiniinae	0 ^б	0 ^б	5,80 ^a	0,050	<0,001
Подф. Diplodiniinae	0 ^б	0 ^б	4. 55 ^a	0,075	<0,001
Epidinium sp.	0 ^б	0 ^б	4,12 ^a	0,096	<0,001
Всего простейших	0 ^c	4,69 ^б	5,85 ^a	0,061	<0,001

Различные буквы в верхнем индексе обозначают существенные различия.

Параметры ферментации

Изменения в характере ферментации наблюдались в трех исследуемых периодах (Таблица 2). Концентрация аммиака увеличивалась, когда в рубце овец присутствовала общая фауна простейших (P <0,001). Также наблюдался сдвиг в продукции SCFA с увеличением уровней уксусной и масляной кислот, когда рубец был колонизирован простейшими (P2 и 3, P <0,01).

10.1371 / journal.pone.0101435.t002 Таблица 2 Параметры ферментации образцов рубца от овец, свободных от простейших (P1), фауны с простейшими голотрихами (P2) или с полной популяцией простейших (P3).

	П1	P2	П3	SED	-п.
pH	6,94 ^а	6,89 ^а	6,73 ^б	0,0496	0,002
Nh4-N (мг / дл)	1,29 ^б	1,39 ^б	4,85 ^a	0.583	<0,001
C2 (мМ)	51,59 ^б	60,16 ^а	63,08 ^а	2,36	<0,001
C3 (мМ)	17,35	14,2	16,55	2,154	0,344
C4 (мМ)	6,37 ^б	9,6 ^a	11,38 ^a	1.159	0,002

Различные буквы в верхнем индексе обозначают существенные различия.

Набор данных T-RFLP

Для анализа отпечатков пальцев было получено 811 фрагментов от 4 различных ферментов после их совместной фильтрации. Анализ T-RFLP включал T-RF в диапазоне от 56 до 644 п.н.

Набор данных NGS

Три миллиона семьсот три тысячи семьсот сорок восемь последовательностей средней длины 229 п.н. были получены с помощью секвенирования Ion Torrent PGM.В результате качественной фильтрации было получено 1 104 458 высококачественных последовательностей, которые были сгруппированы в 864 уникальных OTU с 18361 последовательностью на выборку и период после нормализации. Кривые разрежения, рассчитанные на основе ненормализованных данных (рисунок S1), показали, что для каждого образца соответствующая кривая не выходила на плато, что указывает на то, что полный отбор образцов этих сред не был достигнут. Покрытие Гуда — это средство оценки полноты выборки и вычисляет вероятность того, что случайно выбранная последовательность ампликона из выборки уже была секвенирована.При уровне сходства 97% все выборки V3 имели охват более 99,5%, что означает, что для обнаружения нового филотипа потребуется более 200 (1 / (1-0,995)) дополнительных считываний.

Разнообразие

Разнообразие микробиома восьми животных между тремя периодами показано в таблице 3.

10.1371 / journal.pone.0101435.t003 Таблица 3 Индексы богатства (Ri) и Шеннона-Винера (Sh) NGS (матрица OTU из данных Ion Torrent) или T-RFLP (пики в ампликонах гена 16S рРНК, переваренного с использованием HhaI, HaeIII, MspI и RsaI.

	индексы	П1	P2	П3	SED	-п.
T-RFLP	Ri	172,2 ^б	236,5 ^а	166,5 ^б	12,07	<0,001
	Ш	4,06 ^б	4.68 ^a	3,91 ^б	0,121	<0,001
NGS	Ri	370 ^б	514 ^a	383 ^б	39,8	0,005
	Ш	3,79 ^б	4,59 ^a	3,96 ^ab	0,265	0,023

Геномная ДНК была получена из образцов рубца от 8 животных (от A1 до A8) либо свободных от простейших (P1), фаунированных голотичными простейшими (P2) или полной популяции простейших (P3).Различные буквы в верхнем индексе обозначают существенные различия.

Индекс разнообразия богатства был ниже по результатам T-RFLP, чем по результатам NGS, хотя это не привело к большим различиям в индексе Шеннона-Вайнера (P> 0,05). И численность богатства, и индекс Шеннона-Винера из данных T-RFLP и NGS сравнивали по корреляции (рисунки 1a и 1b). Корреляция между обоими наборами данных показала значение R 0,836 и 0,781 для богатой численности и индекса Шеннона-Винера, соответственно.Также были выполнены дендрограммы с использованием комбинации манхэттенских расстояний и UPGMA (метод невзвешенных парных групп со средним арифметическим) наборов данных NGS и T-RFLP (рисунки 2a и 2b). Тест Мантеля был проведен между обеими матрицами сходства, в результате чего корреляция составила 0,742 (тест Монте-Карло, p = 0,001). При изучении данных с помощью анализа основных компонентов (рисунки 3a и 3b) в обоих наборах данных (T-RFLP и NGS) наблюдалась та же картина в соответствии с периодом. На основные компоненты 1 и 2 вместе приходилось 32.6 и 50,8% дисперсии данных T-RFLP и NGS соответственно.

10.1371 / journal.pone.0101435.g001 Рисунок 1 Корреляция между T-RFLP и NGS.

График корреляции между NGS (матрица OTU из данных Ion Torrent) и T-RFLP (пики в ампликонах гена 16S рРНК, расщепленного с использованием HhaI, HaeIII, MspI и RsaI (дендрограмма показывает объединение данных от всех четырех ферментов) для обоих Richness ( Рисунок 2a) и индекс Шеннона-Виннера (Рисунок 2b). Геномная ДНК была получена из образцов рубца от 8 животных (A1 — A8), либо свободных от простейших (P1, крестики), фауны с простейшими голотрихами (P2, черные треугольники) или с полная популяция простейших (P3, черные квадраты).

10.1371 / journal.pone.0101435.g002 Рисунок 2 Дендрограмма бактериальной популяции рубца, проанализированная с помощью T-RFLP (a) или NGS (b).

Дендрограмма с использованием комбинации манхэттенских расстояний и UPGMA (метод невзвешенных парных групп со средним арифметическим) T-RFLP (пики в ампликонах гена 16S рРНК, переваренного с использованием HhaI, HaeIII, MspI и RsaI (дендрограмма показывает объединение данных всех четырех ферменты) или NGS (матрица OTU из данных Ion Torrent). Геномную ДНК получали из образцов рубца от 8 животных (от A1 до A8), либо свободных от простейших (P1, крестики), фауны с простейшими голотрихами (P2, черные треугольники) или полная популяция простейших (P3, черные квадраты).

10.1371 / journal.pone.0101435.g003 Рисунок 3 График PCA бактериальной структуры рубца, проанализированный с помощью T-RFLP (a) или NGS (b).

Анализ основных компонентов T-RFLP (рис. 4a, пики в ампликонах гена 16S рРНК, расщепленного с использованием HhaI, HaeIII, MspI и RsaI (дендрограмма показывает объединение данных всех четырех ферментов) или NGS (рис. 4b, матрица OTU из Ion Геномная ДНК была получена из образцов рубца 8 животных, свободных от простейших (P1, черные крестики), фауны с простейшими голотрихами (P2, черные треугольники) или с полной популяцией простейших (P3, черные квадраты).

Корреляция между параметрами разнообразия и ферментации

Корреляции продукта и момента Пирсона были выполнены между параметрами ферментации (pH, C2, C3, C4 и NH ₃) и значениями насыщенности из обоих наборов данных (NGS и T-RFLP, таблица 4). Богатство и индекс Шеннона отрицательно коррелировали с присутствием C3 в обоих наборах данных (P <0,05). Ни один из остальных параметров ферментации не показал значимой корреляции с индексами разнообразия, хотя значения корреляции показали небольшие различия между обоими наборами данных (Таблица 4).

10.1371 / journal.pone.0101435.t004 Таблица 4 Корреляция Спирсона (значение rho) между индексами богатства (Ri) и Шеннона-Винера (Sh) для NGS (матрица OTU из данных Ion Torrent) или T-RFLP (пики в ампликонах гена 16S рРНК, переваренных с использованием HhaI, HaeIII, MspI и RsaI) и параметры ферментации образцов рубца.

	Ri				Ш
	NGS	-п.	Т-RFLP	-п.	NGS	-п.	Т-RFLP	-п.
pH	0.34	0,103	0,35	0,094	0,36	0,080	0,41	0,047
Nh4	-0,24	0,249	-0,25	0,244	-0,22	0,308	-0,30	0,158
C2	0,18	0,405	0,08	0,722	0,12	0,567	-0,01	0.976
C3	-0,49	0,016	-0,48	0,017	-0,47	0,023	-0,50	0,014
C4	-0,26	0,227	-0,30	0,152	-0,30	0,148	-0,34	0,105

Значения P указывают на статистическую значимость корреляции.

Анализ канонического соответствия между TRF или OTU и продуктами ферментации показан на рисунках 4a и 4b.Был проведен тест на перестановки (199 перестановок), и модель оказалась очень значимой (P = 0,005 в обоих наборах данных). На две основные оси приходилось вместе 21,5 и 25% общей вариации в наборах данных T-RFLP и NGS, соответственно. Ограничивающие переменные объясняют 34,2% и 38,7% вариабельности соответственно.

10.1371 / journal.pone.0101435.g004 Рисунок 4 График CCA бактериальных сообществ рубца, проанализированный с помощью T-RFLP (a) или NGS (b) и с учетом параметров ферментации.

Канонический анализ соответствия NGS (матрица OTU из данных Ion Torrent) или T-RFLP (пики в ампликонах гена 16S рРНК, расщепленного с использованием HhaI, HaeIII, MspI и RsaI.Формула, использованная в анализе, была следующей: y (данные NGS или T-RFLP) = pH + аммиак (Nh4) + ацетат (C2) + пропионат (C3) + бутират (C4). Геномная ДНК была получена из образцов рубца 8 животных, либо свободных от простейших (P1, черные кресты), либо фауны с простейшими голотрихами (P2, черные треугольники) или с полной популяцией простейших (P3, черные квадраты). Голубые векторы показывают влияние ограничивающих переменных (pH, аммиак (Nh4), ацетат (C2), пропионат (C3) и бутират (C4).

) Классификация данных NGS

На основании классификации RDPII, различия между тремя периодами наблюдались в пределах основных присутствующих типов (рисунок 5, таблица 5).В P1 и 3 наиболее доминирующими типами были Bacteroidetes (49,7 и 68,5% соответственно), за ними следовали Firmicutes (35,9 и 17,5%). В P2 преобладали Firmicutes (40,2%), за ними следовали Bacteriodetes (39,3%). Когда присутствовали все простейшие, доля Bacteroidetes значительно увеличивалась. (P <0,001, таблица 5).

10.1371 / journal.pone.0101435.g005 Рисунок 5 Классификация на уровне филы для OTU из NGS на 97%.

Классификация OTU на уровне Phyla из NGS на 97%. Геномная ДНК была получена из образцов рубца от 8 животных (от A1 до A8) либо без простейших (P1), либо из фауны с простейшими голотрихами (P2) или с полной популяцией простейших (P3).

10.1371 / journal.pone.0101435.t005 Таблица 5 Относительная численность (%) основных типов, идентифицированных в жидкости рубца у свободных от простейших (P1), фауны с простейшими голотрихами (P2) o с полной популяцией простейших (P3) животных.

Phyla	П1	P2	П3	SED	-п.
Актинобактерии	1,15 ^а	0.09 ^б	0,24 ^б	0,304	0,008
Bacteroidetes	49,7 ^б	39,3 ^с	68,5 ^а	3,74	<0,001
Устранение микробов	0,00	0,01	0,00	0,006	0,283
Фибробактерии	2,14	3	2.92	0,995	0,644
Firmicutes	35,9 ^а	40,2 ^a	17,5 ^б	3,8	<0,001
Протеобактерии	0,51 ^б	0,6 ^б	3,23 ^a	0,949	0,019
Спирохеты	0,49 ^а	0,44 ^а	0.16 ^б	0,109	0,02
SR1	0,62	0,64	0,28	0,216	0,208
Synergistetes	0,00	0,01	0,00	0,002	0,06
Tenericutes	0,30	0,06	0,12	0,109	0,095
TM7	0.61	0,51	0,26	0,157	0,106
Веррукомикробия	0,00	0,04	0,04	0,033	0,451

Верхние индексы показывают значительную разницу между средними значениями (P <0,05).

Значимые OTU и анализ родов

Восемнадцать OTU со средней численностью 0,1% или выше показали значительные различия в их численности в течение трех экспериментальных периодов (Таблица S2, Скорректированное значение p <0.1). Из них только три были отнесены к родовому уровню (все три принадлежали к Prevotella sp.) И 10 из 18 принадлежали к отряду Bacteroidales. Три из них считались неклассифицированными до уровня филы.

Десять из сорока двух классифицированных родов бактерий пострадали от колонизации рубца простейшими (Benjamini and Hochberg Q <0,1, рис. 6). Четыре из них (Ruminobacter, Prevotella, Oscillibacter и Streptococcus) присутствовали в средней численности выше 0.5%.

10.1371 / journal.pone.0101435.g006 Рисунок 6 Бактериальные роды значительно подвержены влиянию простейших рубца.

Коробчатые диаграммы родов бактерий, показывающие сдвиг в их относительной численности (в процентах), когда применяется прогрессивная колонизация простейшими в рубце. Образцы берутся из жидкости рубца свободных от простейших (P1), фауны с голотичными простейшими (P2) o с полной популяцией простейших (P3) животных.

Обсуждение

Высокопроизводительное секвенирование позволило биологам изучить новые способы изучения профилирования на основе последовательностей и метагеномики в сложных микробных сообществах, в том числе связанных со здоровьем и болезнями человека [36], [37].Поскольку платформы секвенирования следующего поколения быстро развиваются, секвенирование может стать надежной и конкурентоспособной по цене альтернативой классическим методам снятия отпечатков пальцев. Единственным ограничением большинства платформ NGS является короткая длина считывания приблизительно 250–400 п.н., что обеспечивает плохую филогенетическую информацию по сравнению с последовательностями гена полной длины 16S рРНК (~ 1500 п.н.). Хотя некоторые платформы уже включают большие длины [38]. Стоимость секвенирования следующего поколения резко упала за последние несколько лет и становится доступной альтернативой более классическим методам изучения микробного разнообразия [38], [39].Использование штрих-кодов для мультиплексирования образцов в NGS может снизить стоимость образца, поскольку большая часть затрат, полученных от NGS, связана с ценой чипа и наборов для секвенирования. В нашей собственной лаборатории стоимость обработки 24 образцов с помощью Ion Torrent с использованием одного чипа 316 была сопоставима примерно с 600 фунтов стерлингов с характеристикой T-RFLP с использованием четырех ферментов (около 270 фунтов стерлингов). T-RFLP считается методом по умолчанию для изучения микробного разнообразия в сложных средах [40], [41], здесь мы показываем, что NGS дает очень похожую и сопоставимую информацию.Тем не менее, NGS также позволил нам классифицировать популяции бактерий, на которые влияет присутствие простейших в рубце, более глубоко, чем данные, полученные с помощью T-RFLP, и нацелить на потенциальные виды бактерий, ответственные за метаболические сдвиги. Некоторые веб-инструменты, такие как инструмент филогенетического назначения (PAT), TRUFFLER, APLAUS, доступны для определения состава микробного сообщества путем сравнения с T-RF, предсказанными на основе анализа in silico последовательностей базы данных рРНК [42], [43], [44] но идентификация по-прежнему трудоемка и менее точна, чем данные, полученные NGS.Растущий интерес к NGS привлек многих экспертов из разных дисциплин и произвел революцию в области микробной экологии, продвигая множество направлений исследований. Эта «революция» способствовала созданию многочисленных биоинформатических инструментов, которые доступны для обработки и анализа данных NGS, как было недавно рассмотрено [39], [45]. Постоянное совершенствование алгоритмов анализа данных, применяемых к данным NGS, снизило частоту ошибок при секвенировании баз данных, что делает метод более надежным, чем несколько лет назад [46].

Сравнение между обоими наборами данных показало высокую корреляцию в дендрограммах (R = 0,742), численности богатства (R = 0,836) и индексе Шеннона-Винера (R = 0,781). PCA из обоих наборов данных (рисунки 3a и 3b) продемонстрировал сходный эффект группировки по периоду, который был очень значимым (тест Монте-Карло, P <0,001 в обоих наборах данных). Для более объективной оценки влияния диеты или местонахождения на доминирование среди бактериальных филотипов можно рассчитать несколько индексов разнообразия [47]. Индекс разнообразия Шеннона [48], который использует как количество, так и относительную интенсивность полос, был рассчитан в нескольких исследованиях для проверки влияния таких факторов, как диета, методика обработки образцов и дефаунация на структуру бактериального и архейного сообщества рубца [49 ], [50], [51].Индекс разнообразия Шеннона отражает разнообразие распространенных типов последовательностей. В нашем исследовании индексы Шеннона были похожи между двумя изученными наборами данных (таблица 3). В первый период в наборе данных NGS наблюдалось низкое значение индекса Шеннона, которое можно было сопоставить с низким разнообразием у животных 2 и 7. Этот эффект также наблюдался в видовом богатстве этих особей, а также на дендрограмме и Анализ PCA (рисунки 2a, 2b, 3a и 3b). В целом, более высокая вариабельность в бактериальном сообществе наблюдалась между людьми в P1 по сравнению с P2 и P3 (стандартное отклонение индекса Шеннона данных NGS 0.88, 0,23 и 0,32 в P1, P2 и P3 соответственно). Эти результаты согласуются с более высокой вариабельностью, наблюдаемой у животных без фауны в трех классифицированных наиболее распространенных типах (Fibrobacteres, Firmicutes и Bacteroidetes), и позволяют предположить, что присутствие инфузорий простейших в рубце может иметь стабилизирующий эффект на бактериальные сообщества [ 52]. Данные, проанализированные в этом исследовании, позволили нам изучить переход экосистемы рубца, когда была индуцирована прогрессирующая колонизация простейших рубца.Этот процесс представляет большой биологический интерес [53], поскольку присутствие простейших в рубце прямо или косвенно связано с метаболическими процессами, такими как рециркуляция микробного азота в рубце, выработка метана, а также изменения в короткой цепи. профиль жирных кислот, продуцируемых микробиомом рубца [54], [55], [56], [57].

Десять родов бактерий, на которые значительно повлияло присутствие простейших в рубце (рис. 6). Среди них увеличение Bacteroides, Prevotella и Ruminobacter в P3 указывает на увеличение протеолитической активности в рубце, когда присутствовали энтодиниоморфные простейшие [58].Простейшие Holotrich вносят основной вклад в ферментацию растворимых углеводов [59], но их роль в протеолизе более ограничена. В нашем исследовании присутствие только холотричных простейших не повлияло на относительную численность этих азот-утилизирующих бактерий. Снижение относительной численности Streptococcus может быть связано со способностью простейших рубца предотвращать ацидоз путем поглощения гранул крахмала, способствуя более стабильному pH [60].

В этом эксперименте мы показали, что восемнадцать наиболее распространенных OTU показали значительные различия во время последовательной колонизации рубца простейшими (Таблица S2).Однако почти 50% из них не могут быть классифицированы за пределами класса, а три не могут быть идентифицированы даже на уровне филы. Если все преимущества NGS будут реализованы, очевидно, что необходимы такие проекты, как Hungate 1000 (www.hungate1000.org.nz), цель которых — охарактеризовать и упорядочить геномы огромного количества бактерий в рубце, которые до сих пор остаются. неохарактеризованные и даже во многих случаях некультурные [61].

Выводы

Ion Torrent PGM — надежный и экономичный инструмент для изучения микробного разнообразия в сложных экосистемах, который хорошо сравнивается с точки зрения полученной информации с T-RFLP, особенно когда необходимо изучить большое количество образцов.Кроме того, дополнительная информация, предоставляемая данными NGS с точки зрения классификации микробов, может быть очень важной в исследованиях, направленных на обнаружение ключевых видов, на которые влияют изменения в питании или окружающей среде [45], [62]. Однако наши результаты показали, что традиционные методы снятия отпечатков пальцев, такие как T-RFLP, дают результаты, аналогичные NGS, и поэтому они могут предоставить ценную информацию, когда NGS недоступен или требуется нецелевой микробный анализ. Последовательная колонизация рубца простейшими повлияла на присутствующую бактериальную популяцию с увеличением относительной численности Prevotella, Bacteroides и Ruminobacter.Более гомогенное бактериальное сообщество наблюдается, когда в рубце присутствуют простейшие, что позволяет предположить, что простейшие в рубце могут помочь стабилизировать ферментацию рубца за счет уменьшения вариабельности бактерий, присутствующих у отдельных животных.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Graton Rancheria поддержит продление налога SMART за счет взноса в размере 1 млн долларов

Перейти на мобильный сайт. Сайты: TheJournal. Быстрые знакомства для бизнеса: «Пора выйти из зоны комфорта» Комментарии.

Быстрое знакомство

Событие виртуальных скоростных знакомств для одиноких в Дублине | Ночь одиночных игр. Сб, 18 июля 00 г. Скоростные знакомства в Дублине | Виртуальные одиночные соревнования. Сб, 25 июля. Планируете в Дублине? Независимо от того, являетесь ли вы местным жителем, новичком в городе или просто проезжаете мимо, вы обязательно найдете на Eventbrite что-то, что вызовет ваш интерес.

Мои новости. Персонализируйте свою ленту новостей, выбирая любимые темы, представляющие интерес. Создайте свою собственную новостную ленту. Ирландские новости.Создайте мою ленту новостей. Этот сайт использует файлы cookie для улучшения вашего опыта и предоставления услуг и рекламы. Продолжая просмотр, вы соглашаетесь на использование файлов cookie, описанных в нашей Политике использования файлов cookie.

Вы можете изменить свои настройки в любое время, но это может повлиять на функциональность сайта. Чтобы узнать больше, ознакомьтесь с нашей Политикой в отношении файлов cookie. Открытая журналистика. Отсутствие новостей — это плохие новости. Ваш вклад поможет нам продолжать рассказывать важные для вас истории. Мероприятие по скоростному нетворкингу, организованное SFA.Установление новых деловых связей. Организованный Ассоциацией малых фирм совместно с Vodafone, с целью облегчить предприятиям налаживание новых контактов, Алан Шерлок из группы призвал всех занять свои места.

Жерве — фанат Nintendo, который любит играть в хорошие игры. В таблице ниже подробно указано, как долго покемонов нужно отправлять на работу, чтобы получить электромобили. Тиранитар получает электромобили HP. Что касается Жерве Д. Я не знаю, добьюсь ли я успеха, потому что, хотя он храбрый человек и обученный воин, он ужасно уверен в себе и своей армии.

А ты, полковник Черкасский, держи казаков в обочине — и ты, лейтенант, как только приедешь в Лубни, предупреди князя, чтобы он не спускал глаз с Сайча. Даже если они начнут действовать, повторяю, у нас есть время. Сейчас на Саиче не так много людей; они разбрелись, на рыбалке и охоте, и живут в деревнях по всей Украине. Прежде чем они соберутся, много воды потечет по Днепру.

К тому же имя князя ужасно, и если они узнают, что он положил глаз на Чертомелика, возможно, они останутся в мире.Два или три дня не в счет. А вы, полковник Черкасский, отправляете курьеров с отчетом о деле Конецпольскому и князю Доминику. Но вы, как я вижу, спите.

Наш вердикт.
Новости: Pokemon Sword and Shield: Isle of Armor Expansion получает дату выхода, новые подробности;
Дублин, Ирландия Праздничные мероприятия для одиночных игр | Eventbrite;
сватовство лесбиянок athy!

Барабаш скрестил руки на животе и глубоко спал, время от времени храпя.Старый полковник, когда не ел и не пил, — а он безмерно любил и то, и другое — спал. Да благословит их Бог!

Speed-Dating

Доверили и самого Хмельницкого, с которым канцлер вел те или иные переговоры; а Хмельницкий, несомненно, их ужасно морочит. Лейтенант вздохнул в знак сочувствия. Но Барабаш захрапел еще глубже, а затем пробормотал во сне: «Спаси нас, Христос! Он бы предпочел послать против тебя своих слуг, если бы ты не носил мундир князя; но противиться князю — уродливое дело, даже для слуг Конецпольских.

Я тоже не боюсь засады, имея на своей стороне саблю и группу людей. Пламя свай на площади так ослепило город, что весь Чигирин казался горящим.

С наступлением ночи суета и крики усилились. Евреи не выглядывали из своих домов. На каждом углу толпы Чабани выли жалобные степные песни. Дикие запорожцы плясали вокруг костров, метали в воздух шапки, стреляли из своих «визжащих» и пили гораилку литрами.Кое-где завязалась потасовка, которую погасили старостинцы. Лейтенанту пришлось пробивать себе дорогу рукоятью сабли.

Услышав крики и шум казаков, он временами думал, что восстание уже заговорило. Ему также казалось, что он видел угрожающие взгляды и слышал тихие проклятия, направленные против его личности. В ушах его все еще звучали слова Барабаша: «Спаси нас Христос!

Но чабани в городе пели свои песни громче; запорожцы открыли огонь из мушкетов и поплыли в гораилке.Стрельба и дикое «У-ха!» Через несколько дней лейтенант со своим эскортом резво двинулся в сторону Лубен. После перехода Днепра они двинулись по широкой степной дороге, соединявшей Чигирин с Лубнями, проходя через Джуки, Семи Могил и Хорол.

Похожая дорога соединяла Лубни с Киевом. Раньше, до похода гетмана Жолкевского на Солоницу, этих дорог не было. Люди ехали в Киев из Лубн по пустыне и степи; путь в Чигирин по воде, с обратным по суше через Хорол.На берегах Сулы необъятные леса, которых никогда не касалась нога человека, издавали свои голоса; а также местами на невысоких берегах Сулы, Руды, Слепорода, Коровая, Орявца, Псел и других больших и малых рек и ручьев образовались болота, частично заросшие густыми зарослями и сосновыми лесами, а частично открытые в форма лугов.

В этих сосновых лесах и болотах всевозможные дикие звери нашли просторное убежище; а в глубочайшем лесном мраке бесчисленным множеством жили бородатые зубры, медведи, с дикими кабанами, а рядом с ними волки, рыси, куницы, олени и дикие козы.В болотах и рукавах рек бобры строили свои плотины.

Среди запорожцев ходили легенды, что этим бобрам было около ста лет и они были белы как снег от времени. По возвышенным сухим степям бродили стада диких лошадей с лохматыми лбами и налитыми кровью глазами. Реки кишели рыбой и водоплавающими птицами. Это была чудесная страна, полусонная, но несущая следы прежней деятельности человека.

Он всюду был заполнен руинами городов предыдущих поколений; Лубни и Хорол возникли из таких руин.Повсюду в стране было множество курганов, древних и современных, уже покрытых сосновыми зарослями. Здесь, как и в Пустоши, по ночам поднимались призраки и вампиры. Старые запорожцы, сидя у своих костров, рассказывали чудесные сказки о том, что происходило в тех лесных глубинах, откуда доносился вой неизвестных зверей, — крики получеловека, полузверя, — ужасные звуки, как битвы или погони.

Под водой слышен звон колоколов в затопленных городах. Земля была негостеприимной, малодоступной, в местах слишком мягкой, в местах, страдающих от недостатка воды, — сухой, сухой и опасной для жизни; потому что, когда люди все же поселились там и начали обрабатывать землю, они были сметены набегами татар.

Но его часто посещали запорожцы во время охоты — или, как они выражались, «промысла» — вдоль всех рек, оврагов, лесов и тростниковых болот в поисках бобров в местах, где даже существовало существование. известно немногим. И все же оседлая жизнь изо всех сил пыталась прижиться к этим местам, как растение, которое вцепляется в землю своими корнями везде, где только может, и, хотя и вырывается неоднократно, снова вырастает.

На пустынных местах выросли города, поселения, колонии, деревушки и одиночные жилища.Земля местами была плодородной, а свобода манила. Но сначала жизнь расцвела, когда эти земли перешли во владение князей Вишневецких. Князь Михаил после женитьбы на молдавской даме начал тщательно организовывать свои владения за Днепром. Он привел людей, заселил пустоши, освободил от службы на тридцать лет, построил монастыри и ввел свою княжескую власть.

Даже поселенец в этой стране со времен непризнанного приоритета, считавший, что он находится на своей земле, был готов опуститься до статуса плательщика дани, поскольку за свою дань он попал под мощную защиту князя. кто охранял его, — защищал его от татар и людей снизу, которые часто были хуже татар.Но настоящая деятельность началась под железной рукой юного князя Ереми. Люди снизу не пытались атаковать.

Вступили в строй местные беспорядочные отряды. Дикие, грабительские люди, которые долгое время существовали насилием и набегами, теперь сдерживались, занимали заставы на границах и лежали на границах государства, были как бык на цепи, угрожая злоумышленникам зубами. Все процветало и было полно жизни. Дороги проложены по следам древних магистралей; реки были перекрыты дамбами, построенными пленными татарами или людьми снизу, пойманными на грабеже с вооруженной рукой.Мельница теперь звучала там, где ветер дико играл по ночам в камышах, и где волки выли вместе с призраками утонувших людей.

Более четырехсот колес, не считая многочисленных ветряков, перемалывали зерно за Днепром.

How To EV Train Fast in Pokemon Sword and Shield (Exploit)

Более сорока тысяч человек были данью казне принца. В лесу кишели пчелы. На границах постоянно росли новые деревни, деревушки и одиночные дома.В степях, рядом с дикими стадами, паслись целые стада домашнего скота и лошадей.

Бесконечное однообразие сосновых рощ и степей разнообразил дым коттеджей, позолоченные башни церквей, католических и православных. Пустыня превратилась в густонаселенную землю. Лейтенант Скшетуский путешествовал с удовольствием и без спешки, словно пересекая свою землю, имея в дороге много свободного времени. Было начало января; но та чудесная, исключительная зима не предвещала своего приближения.

РОЖДЕНИЙ — перевод на чешский

Он построил клиники, в которых оперировал женщин, страдающих свищами после тяжелых родов .

Поставил клиники, в ничж оперуй жены трпіці піштелем по компликованенем породу.

EnglishВсе это связано с иммиграцией и рождений, — иммигрантами.

Tento nárůst je způsoben přistěhovalectvím a počtem dětí, které se přistěhovalcům rodí.

EnglishУчреждения должны поощрять рождений посредством соответствующей политики поддержки семьи.

Orgány proto musí podporovat rození dětí prostřednictvím vhodné politiky podpory rodiny.

EnglishВ случае нескольких рождений , я считаю, что отпуск должен быть соответственно продлен.

В případě vícečetných porodů si myslím, že by dovolená měla být odpovídajícím způsobem prodloužena.

Еще одна скрытая проблема — это социальный состав рождений .

Dalším skrytým problémem je společenské složení narozených dětí.

Английский языкТакже поводом для беспокойства является ситуация с регистрацией рождений, и низкий уровень школьного образования.

Dalším důvodem znepokojení je situace v souvislosti s registrací porodů a nízká úroveň vzdělanosti.

English (FR) Господин Президент, договоры похожи на родов : одним нужна эпидуральная анестезия, другим — кесарево.

(FR) Pane předsedající, zrod nové smlouvy je jako zrod nového života: někdy je nutný epidural, jindy císařský řez.

EnglishОдна из четырех рождений приходится на матерей, которые сами не родились в Великобритании, то есть 170 000 рождений в год.

Jedno ze čtyř dětí se narodí matkám, které se samy ve Spojeném království nenarodily, což je 170 000 dětí ročně.

EnglishПолучение свидетельства о рождении является серьезной проблемой в Йемене, где только 22% из рождений официально зарегистрированы, по данным ЮНИСЕФ.

Зайскать родной список в Емену важны проблемы, Еликож подле ЮНИСЕФ и там официально зарегистрирован поуз 22% порода.

Английский (EL) Госпожа Президент, могу я спросить Уполномоченного, действительно ли во всех государствах-членах декларируется рождений, детей?

(EL) Vážená paní předsedající, smím se zeptat pana komisaře, zda je jisté, že se ve všech členských státech přiznává narození dětí?

Г-н президент, демографы говорят нам, что для того, чтобы выжить, населению необходим коэффициент рождаемости, равный 2.1 живёт рождений на одну женщину.

Pane předsedající, demografové tvrdí, že k udržení populace je zapotřebí, aby porodnost dosahovala 2,1 živě narozených dětí na jednu ženu.

EnglishЛучшие больницы, куда врачи обращаются для лечения рака, родов, , инсульты, болезни сердца, эндопротезирование тазобедренного сустава, 4 а.м. ~~~ аварийные ситуации.

Nejlepší nemocnice, kam by sami doktoři šli s rakovinou, porody, nemoci srdce, výměny kyčelních kloubů nebo problémy ve 4 ráno «.

EnglishПоэтому, на наш взгляд, лучшим решением было бы шесть обязательных недель и увеличение до 20 недель для нескольких родов и грудного вскармливания.

Proto bylo dle našeho názoru nejlepším řešením šest povinných týdnů dovolené a prodloužení на 20 дней в případě porodu více dětí a kojení.

EnglishD Несмотря на это, только 1% этой пуповинной крови, которая так полна возможностей и перспектив, сохраняется в Европе, 1% из более чем 15 миллионов рождений в год.

Navzdory to pouze 1% této pupečníkové krve, která je tak plná možností a příslibů, se v Evropě uchovává, 1% z více než 15 миллионов пород за рок.

EnglishThere are тысячи мутантов рождений , смертей от рака и целые области опустошены от использования этого оружия, которое было произведено известной компанией Monsanto.

Роди этот desítky tisíc zmutovaných dětí, další lidé umírají na rakovinu a celé области leží ladem kvůli použití této zbraně, kterou vyráběla dobře známá společnost.

Чего мы не знаем о материнском молоке Кэти Хайнд

: 00: 27 3

00 в лаборатории сравнения

5 понять его сложность

ance , потому что молоко 4 — это еда их матери медицина и сигнал.

:09 08 4 4 4, колонизирующие младенцев, которые являются кишечного тракта.

4 24

материнское молоко обеспечивает гормоны, которые сигнализируют телу младенца.

3 предоставляется.

и наши приоритеты превратились в наши приоритеты .

00 Вашингтон, округ Колумбия 9123 , который содержит 25 миллионов статей

00 03:25 912 (младший)

Молодое млекопитающее приспособлено к потреблению

9024 00:04:13 4 9122 и детская слюна

00 начиная понимать, что биологический рецепт молока

9124 9123 intend 9000 9000 матери кормить грудью,

9 2 3 912 и кормление грудью.

4 4 молока поставлять.

: 14

о том, как наилучшим образом поддержать период лактации и грудного вскармливания.

нам нужно чтобы привязать его к передовым исследованиям

kii12a sotsiaalteadustes,

слишком часто 9 1224

ajaloolised traumad ja kaudsed eelarvamused

просто передача мамам сообщений о грудном молоке

и 9024 избиратели, которые их избирают.

:9 :90 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 9123 ,

9125 9125 9123 разнообразие мам, воспитывающих своих детей

ujutada : 09: 38 3 но много потенциальных граней того, что делает женщин потрясающими.


Слышали ли вы когда-нибудь о том, что грудное вскармливание бесплатно?	Kas olete kunagi kuulnud seda, kuidas imetamine on tasuta?
00:00:12
(Смех)	(Наэр)
00:00:17
Ага, это довольно забавно, 34 Джа, см. На päris naljakas,
00:00:18
, потому что это бесплатно только в том случае, если мы не ценим время и энергию женщин.	sest see on tasuta ainult siis, kui me ei hinda naiste aega ja energiat.
00:00:21
Любая мама может сказать вам, сколько времени и энергии на это уходит	Iga ema võib teile öelda, kui palju aega ja energiat см. Võtab
, чтобы превратить ее тело в жидкое	oma keha vedeldama
00:00:32
, чтобы буквально раствориться		9122
00:00:34
(Смех)	(Наер)
00:00:36
, пока она кормит этого драгоценного маленького людоеда.	kui ta toidab seda väärtuslikku väikest inimsööjat.
00:00:38
(Смех)	(Наер)
00:00:41
Молоко — вот почему млекопитающие сосут.	Piim on põhjus, miks imetajad imevad.
00:00:43
В Университете штата Аризона,	Аризона osariigi ülikoolis
00:00:47
imetamise võrdlevas labouris,
00:00:49
Я расшифровываю состав материнского молока	Dekodeerin emade piima koostise	234
mõista selle keerukust
00:00:54
и как это влияет на развитие ребенка.	ja kuidas см. Mõjutab imikute arengut.
00:00:57
Самое важное, что я усвоил	Кыйге тяхтсам, мида олен õппинуд
00:01:01
9024 что мы недостаточно делаем для поддержки матерей и младенцев.	см., Et me ei tee piisavalt emade ja imikute toetamiseks.
00:01:04
И когда мы подводим матерей и младенцев,	Ja kui me emad ja beebid alt vedame,
00:01 9245		мы подводим всех, кто любит матерей и детей		me kukume läbi kõigist, kes armastavad emasid ja lapsi
00:01:12
отцы и дедушки, партнеры, дедушки, бабушки	isad, partnerid, vanavanemad, tädid,
00:01:16
друзья и родственники, которые составляют наши человеческие социальные сети.	sõbrad ja sugulased, kes loovad meie inimeste sotsiaalseid võrgustikke.
00:01:19
Пора отказываться от простых решений и простых лозунгов,	On aeg loobuda lihtsatest lahendustest ja lihtsatest loosungitest, 42
и разберитесь с нюансами.	ja maadelda nüansiga.
00:01:29
Мне очень повезло	Mul oli väga vedanud
00:01:32
, чтобы запустить это smack
очень рано,	väga varakult selle nüansi sisse lööma,
00:01:34
во время моего первого интервью с журналистом	vajaku 902 minajaku 00:01:37
когда она спросила меня,	kui ta minult küsis,
00:01:40
«Как долго мать должна кормить ребенка грудью?»	«Пики куи кауа, эма ома, последняя imetama?»
00:01:42
И именно это слово «должен» меня остановило, 900 03	Ja see sõna «peaks» tõi mind lühikeseks,
00:01:48
потому что я никогда не скажу женщине, что ей делать со своим телом.	sest ma ei ütle kunagi naisele, пики мида та ома кехага тегема.
00:01:52
Младенцы выживают и процветают	Имикуд jäävad ellu ja arenevad
00:01:59
sest nende ema piim on toit, ravim ja signaal.
00:02:00
Для детей младшего возраста,	Noortele imikutele
00:02:05
34 9122 9122 материнское молоко для полноценного питания ema piim on täisväärtuslik dieet
00:02:06
, который предоставляет все строительные блоки для их тел,	mis tagab nende keha kõik ehitusmater3
, который формирует их мозг	mis kujundab nende aju
00:02:11
и поддерживает всю их деятельность.	ja kütab kogu nende tegevust.
00:02:12
Материнское молоко также питает микробы	Ema piim toidab ka mikroobe
00:02:15
mis koloniseerivad imiku soolestikku.
00:02:18
Матери едят не только для двоих,	Emad ei söö ainult kahe eest,
00:02:21
они едят от двух до триллионов.	nad söövad kaheks triljonini.
00:02:22
В молоке содержатся иммунофакторы, которые помогают бороться с патогенами	Иммунофактореид Piim pakub, mis aitavad patogeenidega võidelda
ja ema piim annab гормон, мисс аннавад сигналали имику кехале.
00:02:31
Но в последние десятилетия	Kuid viimastel aastakümnetel on
00:02:37
oleme tulnud piima enesestmõistetavaks võtma.
00:02:38
Мы перестали видеть что-то на виду.	Me ei näinud enam midagi silmapiiril.
00:02:40
Мы начали думать о молоке как о стандартизированном, гомогенизированном, пастеризованном,	Me hakkasime mõtlema piimast kui standardiseeritud, homogeenitud12, pastöriseeritud 02:43
в упаковке, порошке, ароматизаторах и составах.	pakendatud, pulbristatud, maitsestatud ja koostisega.
00:02:48
Мы отказались от молока человеческой доброты	Loobusime inimliku lahkuse piimast
00:02:53
ja pööras meie Prioriteedid mujale.
00:02:55
В Национальных институтах здравоохранения	Riiklikes tervishoiuinstituutides
00:02:58							9 Вашингтон, округ Колумбия DC-s
00:03:00
— Национальная медицинская библиотека,	на riiklik meditsiiniraamatukogu,
00:03:02 34		mis sisaldab 25 miljonit artiklit
00:03:04
мозговой трест наук о жизни и биомедицинских исследований.	eluteaduse ja biomeditsiiniliste uuringute aju usaldus.
00:03:07
Мы можем использовать ключевые слова для поиска по этой базе данных,	Selle andmebaasi otsimiseks saame kasutada märksõnu,
9122 и когда мы это сделаем,		ja kui me seda teeme,
00:03:15
мы обнаружим почти миллион статей о беременности,	avastame rasedul arjitohta ,
00:03:17
, но гораздо меньше в отношении грудного молока и лактации.	kuid rinnapiima ja imetamise kohta palju vähem.
00:03:20
Если увеличить количество статей, посвященных только исследованию грудного молока,	Kui suurendame artiklite arvu, mis uurivad lihtsalt rinnapiima,
мы видим, что знаем гораздо больше о кофе, вине и помидорах.	näeme, et teame palju rohkem kohvi, veini ja tomatite kohta.
00:03:29
(Смех)	(Наер)
00:03:34
Мы знаем об эректильной функции вдвое больше.	Erektsioonihäiretest teame üle kahe korra rohkem.
00:03:36
(Смех)	(Наер)
00:03:40
Я не говорю, что мы не должны знать об этих вещах	Ma ei ütle, et me ei peaks nendest asjadest teadma
00:03:44
Я ученый, думаю, мы должны знать обо всем.	Olen teadlane, arvan, et peaksime kõigest teadma.
00:03:47
Но это мы знаем намного меньше	Aga et me teame palju vähem
00:03:49
(Naer)
00:03:52
о грудном молоке	rinnapiima kohta
00:03
esimene noor imetaja on kohandatud tarbima
00:03:55
должно нас рассердить.	вершины Мейд Вихастама.
00:03:58
Во всем мире девять из 10 женщин будут иметь хотя бы одного ребенка в своей жизни.	Ülemaailmselt saab üheksast naisest kümnest elu jooksul vähemalt ühe lapse.
00:04:00
Это означает, что ежегодно рождается почти 130 миллионов младенцев.	См. Tähendab, et aastas sünnib ligi 130 miljonit last.
00:04:04
Эти матери и младенцы заслуживают самой лучшей науки.	Need emad ja beebid väärivad meie parimat teadust.
00:04:09
Недавние исследования показали, что молоко не просто способствует росту тела,	Hiljutised uuringud on näidanud, et piim ei kasva ainult keha,
он подпитывает поведение и формирует нервное развитие.	см. Toidab käitumist ja kujundab neurodevelopmenti.
00:04:17
В 2015 году исследователи обнаружили	2015. aastal avastasid teadlased
00:04:21
et rinnapiima ja sülje segu
00:04:24
, в частности, детская слюна	täpsemalt, lapse
вызывает химическую реакцию, в результате которой образуется перекись водорода	põhjustab keemilise reaktsiooni, mis tekitab vesinikperoksiidi
00:04:29
и сальмонелла, убивающая сальмонеллу.	mis võib tappa stafülokardi ja salmonelloosi.
00:04:33
И от людей и других видов млекопитающих,	Inimestelt ja teistelt imetajaliikidelt,
00:04:36
hakkame aru saama, et piima bioloogiline retsept
00:04:38
может отличаться при производстве для сыновей или дочерей.	poegade või tütarde jaoks toodetud tooted võivad olla erinevad.
00:04:41
Когда мы дойдем до донорского молока в отделении интенсивной терапии новорожденных,	Kui jõuame vastsündinute интенсивноиврави osakonnas doonoripiima
или формула на полке магазина,	või valem poeriiulil,
00:04:49
это почти универсальный размер.	см. Sobib peaaegu kõigile.
00:04:51
Мы не думаем о том, что сыновья и дочери могут расти разными темпами,	Me ei mõtle sellele, kuidas pojad ja tütred võivad erineva3 kiirada
00:04:54
или другими способами,	või erinevatel viisidel,
00:04:58
9000 a2 и часть этого молока может быть 2 .	и см. Piim võib olla selle osa.
00:04:59
Матери получили сообщение	Emad on teate saanud
00:05:02
ja enamik emadest kavatseb imetada,
00:05:04
, но многие из них не достигают своих целей грудного вскармливания.	kuid paljud ei saavuta oma rinnaga toitmise eesmärke.
00:05:07
Это не их провал	См. Полюс nende ebaõnnestumine
00:05:11
.	см. На мейе ома.
00:05:13
Все более частые медицинские состояния, такие как ожирение, эндокринные расстройства,	Üha levinumad meditsiinilised seisundid nagu rasvumine, endokriinsed
Кесарево сечение и преждевременные роды	Кесарево сечение
00:05:20
— все это может нарушить основную биологию лактации.	kõik võivad häirida laktatsiooni aluseks olevat bioloogiat.
00:05:22
И многие женщины не имеют квалифицированной клинической поддержки.	Ja paljudel naistel puudub teadlik kliiniline tugi.
00:05:25
Двадцать пять лет назад,	25 aastat tagasi
00:05:29
Всемирная организация здравоохранения UNICEF Всемирная организация здравоохранения критерии	Maailma Terviseorganisatsioon ja UNICEF kehtestasid kriteeriumid
00:05:31
для больниц, которые считаются дружественными к ребенку	aks et hak. : 35
, которые обеспечивают оптимальный уровень поддержки для связи матери и ребенка	mis pakuvad optimaalset tuge ema ja lapse sidumiseks
00:05:37
ja imikute toitmine.
00:05:41
Сегодня только каждый пятый младенец в Соединенных Штатах	Täna on Ameerika Ühendriikides ainult üks viiest lapsest	2
родился в детской больнице.	на sündinud beebisõbralikus haiglas.
00:05:47
Это проблема,	См. По проблеме,
00:05:51
, потому что многие проблемы могут решать матери.	sest emad saavad maadelda paljude probleemidega
00:05:52
в минутах, часах, днях и неделях лактации.	imetamise minutites, tundides, päevadel ja nädalatel.
00:05:55
У них могут быть проблемы с установкой защелки,	Neil võib olla raskusi riivi loomisega,
2 0034 с боль,		валуга,
00:06:02
с молоком	piimaga
00:06:03
ja arusaamad piimavarustusest.
00:06:04
Эти матери заслуживают хорошо осведомленного медицинского персонала	Нужен emad väärivad asjatundlikku kliinilist personali
00:06 .	kes neist protsessidest aru saavad.
00:06:11
Матери будут звать меня, пока они борются с этой борьбой,	Emad helistavad mulle, kui nad nende võitlustega maadlevad,
плачет дрожащими голосами.	nutt värisevate häältega.
00:06:19
«Это не работает.	» См. Ei tööta.
00:06:23
Это то, на что я должен естественно уметь.	Seda Peaksin ма loomulikult suutma teha.
00:06:25
Почему не работает? «	Miks see ei tööta?»
00:06:28
И только потому, что что-то эволюционно древнее	Ja lihtsalt selleki oni3oluts evidneerast	00:06:30
не означает, что это легко или что у нас сразу получается хорошо.	ei tähenda, et см. Oleks lihtne või et me oleksime selles hetkega head.
00:06:34
Вы знаете, что еще является эволюционно древним?	Teate, mis on evolutsiooniliselt iidne veel?
00:06:37
(Смех)	(Наер)
00:06:40
Секс.	Сек.
00:06:44
И никто не ожидает, что мы начнем с хороших результатов.	Ja keegi ei eelda, et hakkame selles osas hästi hakkama saama.
00:06:45
(Смех)	(Наер)
00:06:48

Врачи 9123 обеспечивают наилучшее качество обслуживания . Kliinikud pakuvad kõige paremini kvaliteetset ja õiglast ravi
00:06:51
когда они имеют непрерывное образование	kui neil on täiend224	selle kohta, kuidas kõige paremini laktatsiooni ja imetamist toetada.
00:06:58
И для того, чтобы продолжить образование,	Ja selle täiendõppe saamiseks по телефону
00:07:05 34 4		peame selle toetama tipptasemel uurimistööle
00:07:04
как в естественных, так и в социальных науках,
00:07:06
, потому что нам нужно распознать	sest peame ära tundma
00:07:10				9		seda liiga tihti
00:07:11
исторические травмы и скрытые предубеждения
00:07:13
сидит в пространстве между молодой матерью и ее врачом.	istuda värske ema ja tema kliiniku vahelises ruumis.
00:07:17
Тело политическое.	Кеха о полиитилине.
00:07:22
Если наша поддержка грудного вскармливания не является интерсекциональной,	Kui meie rinnaga toitmise tugi pole ristteeline,
				00:01 это недостаточно хорошо.	см. Полюс piisavalt hea.
00:07:28
А для мам, которые должны вернуться на работу,	Ja emade jaoks, kes peavad tööle naasma,
2 0034
, потому что такие страны, как США, не предоставляют оплачиваемый отпуск по уходу за ребенком,	куна продано riigid nagu USA ei paku tasulist vanemapuhkust,
00:07:34
через несколько дней после родов.	neil võib olla vaja minna tagasi nii lühikese ajaga kui vaid mõni päev pärast sünnitust.
00:07:39
Как мы оптимизируем здоровье матери и ребенка	Kuidas optimeerida ema ja imiku tervist
00:07:44
lihtsalt emadele rinnapiimast rääkides
00:07:48
без предоставления институциональной поддержки	:	institutsiona 51
, который способствует установлению связи между матерью и младенцем	mis hõlbustab ema ja lapse sidumist
00:07:54
для поддержки грудного вскармливания?	imetamise toetamiseks?
00:07:56
Ответ: мы не можем.	Vastus on: me ei saa.
00:07:59
Я обращаюсь к вам, законодатели,	Ma räägin teiega, seadusandjad,
00:08:03
ja valijad, kes nad valivad.
00:08:05
Я обращаюсь к вам, создатели рабочих мест и подразделения по ведению коллективных переговоров,	Ma räägin teiega, töökohtade loojate ja kollektiiv3002ustebirä34 08:07
и рабочие, и акционеры.	töötajad ja aktsionärid.
00:08:12
Мы все заинтересованы в общественном здоровье нашего сообщества,	Мейл кыйгил на oma kogukonna rahvatervises osalus,
, и все мы должны сыграть свою роль в достижении этого.	ja selle saavutamisel на рулоне meil kõigil oma.
00:08:19
Грудное молоко является частью улучшения здоровья человека.	Rinnapiim on osa inimeste tervise parandamisest.
00:08:23
В отделении интенсивной терапии, когда младенцы рождаются рано, больны или травмированы,	отделения интенсивной терапии, kui imikud sünnivad varakult või on haigastat 9024 või
00:08:27
молоко или биоактивные компоненты в молоке могут иметь решающее значение.	piim või piima bioaktiivsed koostisosad võivad olla kriitiliselt olulised.
00:08:31
Окружающая среда или экология,	Keskkonnad või ökoloogiad,
00:08:35 34 сообщества с высоким или инфекционным риском болезнь,		või kogukondades, kus on suur nakkushaiguse oht,
00:08:37
грудное молоко может быть невероятно защитным.	rinnapiim võib olla uskumatult kaitsev.
00:08:40
Там, где есть чрезвычайные ситуации, такие как штормы и землетрясения,	Seal, kus on hädaolukordi, nagu tormid ja maavärinad, 9000 003
при отключении электричества,	kui elekter kaob,
00:08:46
при отсутствии безопасной воды	9000 vesi kui pole
00:08:47
грудное молоко может обеспечить грудное вскармливание и увлажнение.	rinnapiim võib hoida lapsi toidetud ja hüdreeritud.
00:08:49
И в контексте гуманитарных кризисов,	Humanitaarkriiside kontekstis
00:08:54		nagu sõjapiirkondadest põgenevad Süüria emad,
00:08:57
Самые маленькие капли могут уберечь детей от самых серьезных глобальных проблем.	väikseimad tilgad suudavad imikuid puhastada suurimatest ülemaailmsetest väljakutsetest.
00:09:00
Но понимание грудного молока — это не только сообщение матерям	Kuid rinnapiima mõistmine ei tähenda ainult emadele sõnumite saatmist
и политики.	ja poliitikakujundajad.
00:09:12
Это также касается понимания важности грудного молока	См. На ka selle mõistmine, mis on rinnapiimas oluline
00:02
, чтобы мы могли поставлять более качественные смеси	et saaksime pakkuda paremaid valemeid
00:09:17
мамам, которые не могут или не кормят грудью по какой-либо причине.	emadele, kes ei saa või ei imeta mingil põhjusel.
00:09:20
Мы все можем работать лучше	Me kõik saame teha paremat tööd
00:09:24
beebisid kasvatavate emade mitmekesisuse toetamine
00:09:26
различными способами.	mitmel viisil.
00:09:29
Как женщины во всем мире борются	Kui naised kogu maailmas võitlevad
00:09:33		5 и экономическое равенство,	saavutada poliitiline, sotsiaalne ja majanduslik võrdsus,
00:09:34
, мы должны переосмыслить материнство
как не центральный, ключевой аспект женственности,	kui mitte naiselikkuse keskne, põhiline aspekt,
00:09:41
kuid üks paljudest potentsiaalsetest tahkudest, mis muudab naised vingeks.
00:09:46
Пора.	На аег.
00:09:51
(Аплодисменты)	(Aplaus)
00:09:53

Купить в марте 20umbi — онлайн

Все brands3 Sprouts4 Moms4M4meglam59sA Kiddya кусочки paperab Новый ZealandAbbottAbibAbundanceAden & AnaisAerisAeroMoovAG ToucheAguardAh Вэн KohAierleAikaydanAilebebeAimsityAkarana BabyAlcosmAlexis PureAlivioAll О CocoAll RightAllertoinAlobabyAlphabet JuniorAlvinsAmarylloAmerican США BabyAnakkuAnantaraAndreaAnelloAnetosAngeAniosAnkouAnmumAnnabel KarmelAnumiAnyguardAOVAplausApogenAppetonApple MonkeyApplecrumbyAppleTreeApramoArau BabyArdoAriulArmor 8AromababyASH IIAstra GuardAstrokidAtom и в DotAttipasAudelia NaturalsAugust MoonAutumnzAvalonAvanchyAVORAAwaruaB & BB.BoxB.ToysBaba baaBabeStepsBabezeeBaby BrezzaBaby CarrieBaby DanBaby EinsteinBaby FabzBaby JoggerBaby KikoBaby KoalaBaby LoveBaby Moby Детские Monsters Детские MooBaby н GoodsBaby NaturaBaby SensoryBaby шаги ББ-3Baby Стиль AsiaBaby TechBaby TulaBaby Wrap от Mak YangBabyBaby2UBabybioBaBydocBabyhoodBabyjumiBabyloveBabylove DiapersBabymelBabyOrganixBabyprimeBabySafeBabyUniBabywears.myBABYZENBacoffBaebisBambino MioBambo NatureBambooliteBammaxBarbieBare NuhcessitiesBasilicBatisteBazoongiBB IceBB БУВ MeBBHBBs-1BBs-2be DelightBeabaBeanie NapBearBebamourBebe а.е. LaitBebe ComfortBebe ConfortBebearBebecookBebedangBebeganicBebikuBeblumBeccaBabyBecoBeiensBeikangMei Отжим StationBellamy’sBellary NatureBelly BanditBelThBeminimoreBen 10BenBatBentley OrganicBepanthenBerrcomBerry CBiba ToysBibadoBiBiLoveBiconiBig героя 6Big LivingBio-HomeBio-LifeBio-OilBioGaiaBiolaneBioPlusBiosafe4uBistosBitattoBitbobBite FighterBiyougenekiBlackmoresBlessed BeeBlooming BabyBmamaBobaBobita BoboiboyBonbebeBoonY & CoBrainBoxB rand’sBravadoBremedBright StartsBritaxBrotherBruderBrush BabyBubblesBubeeBudding BabyBudsBumble BeeBumboBunnyBabiesBzu BzuC2CCaaochoCadeauCailynaCalaziteCalibowlCalifornia BabyCaliphCapellaCareDoCarinaCarpenterCarrie BacBusterCarsCarter’sCartersCBXCentifolia BebeCetaphilChantivaCharlie BananaCheekaabooCheeky ChompersChek HupCherub RubsChiccoChildren WorldChilds FarmChillafishChing-ChingChomelChuchubabyCimilreCiPUCitrexClaire OrganicsClean GuardCleansmartClear LivingClearblueClementoniCleverinCN CubeCN FrozenCoby HausCode JuniorsCOGOColorlandColostrumCombiComfy BabyComfy CareComfy LivingComotomoCorvanCosattoCosmodermCosrxCozy LadyCraneCrayolaCrollaCubikaCuddle MeCuddleCoCuraprox BabyCybexD’AGEDaflonDawsonDay 2 DayDe CartonDe NaturelDearyaDentinoxDentisteDermaAidDermoplexDiamondPureDiaper торт MalaysiaDiapexDiaResQDickensDidi и FriendsDioflexDipseeionDisney BabyDisney младенца ToysDisney FashionDisney Поиск ДориДисней Холодное СердцеДисней НаизнанкуДисней МиккиПринцессы ДиснеяДисней София ney Star WarsDlamiDoddle & CoDoonadoTERRAD Двойное счастьеDouble MonkeysDoveDr BrownDr MamaDr ShieldDr.AtoDr. DuduDrapoleneDreamgeniiDrJuneDry-ProDrypersDumexDuphalacDuraSafeDutch LadyEarth BebeEarth LivingEarth MamaEarth в BestEasyWalkerEatalian Экспресс Eco PharmaEcoHerbsEcoliteEcominimEcos3EcostoreEcoverEcowellEducational InsightsEdushapeEgoEldonElecleanElecomElianwareElipsekidsElseeEmma-JaneEnfagrowEnfagrow A + EnfalacEnfalac A + EnfamamaEnglish Чай ShopEnsureEplasErgobabyERHEsobelleEUBOSEucaProEuky BearEurodrugEve LoveEve в TowelEvenfloEveryday BabyEvinEvo в BabyEynshamEz BabyEzerraEZPZEzy PzyFabulous MomFacileFAFCFairWorldFamttiniFarlinFarmerlyFCBarcelonaFeebeesFeedmilkFehnFerrariFiffyFigara11FigsolFirgiFischer TipFischertechnikFisher PriceFitti GoldFlexmobFlipperFlying PigeonFolic AcidFontActivForeverFreemieFresh MartFreshSenseFrisoFrizzlifeFrutaraFujifilm InstaxFulliconFunbiesFybogelG-Star R-RayyanGabagGaiaGaksimilGAPGarden из EDENGaviscongbGenkiGerberGethaGeutherGgumbiGHHS Healthcare CentreGiffy & CoGifthingGigoGio Подушка MalaysiaGK GermKillerСтеклокГлеоитовый ГардеробПерчаткаСветовая лабораторияГлюколи nGogoKidsGoo.Ngood Пока FeverGood DinosaurGoodbabyGoodmaidGoodMorningGoosebumps StudioGRGracoGreenBeansGrow & UpGuguGUMGynotalHaakaaHabibHaenimHaenim ToysHagen’sHairChampHakumaikoujiHalal CommissaryHalfordHallmarkHamiltonHanilHansaplastHantar FreshHapeHappy BabyHappy CotHappy GrainsHappy LinkHappy TotHappyganicsHartmannHauckHealth ParadiseHealth TechHearttexHegenHeinzHemoRidHerbacin HerbionHikosen CaraHimalayaHimmelHippopo младенца SpaHitoHLPHolabebeHomecareHopkinHot WheelsHPDHSEHudson BabyHuggiesHugoBabyHuman NatureHurix’sHush свидания (OEM) HybridiBabyiBaeBaeIberetIbu AnisIchiroIDOREIguana OnlineImabari TowelInabellaInfantinoInfunbebeING OrganicIngenuityInky StationeryInnobabyInnolacInternationalIntexInujirushiIsa UchiIvenetJack N JillJanie & JoeJaploJellymomJellyPOPJenniJetteJingle JungleJitronJM SolutionJoan MiroJoieJoielleJoovyJordanJoy AngelJoyleeJulie’sJumperJun BambooJusMasterJust GentleJustice LeagueJWorldK.MOMKagomeKait Образ жизни StoreKangovouKAPSKarihomeKathnBelleKeaide BiddyKelab MamaKemyKerasysKettle BrandKettlerKhalishKiddimotoKiddyliciousKidroKids StationKidsmeKidzbee MalaysiaKimi MommyKindervilleKinderwagonKing DamKinohimitsuKira KiraKISS mineralKiwi KiwiKji OrganicsKji PharmacoKji & CoKKKKleenguardKleensoKlynn FoodKokomuKokoyoyoKool FeverKoolitKoopersKUBKuKu DuckbillKuo HealthLa CuisineLacerLacteLacteatkiesLactoMommaLadybirdLamazeLansinohLascalLaventeLavieLazzLe NaturalLeapfrogLearning Ресурсы LegoLekebabyLennylambLepinLeradoLessyLG BabienceLife RegenLifebuoyLifefactoryLifeplus BabyLILCUTIEPIELilie PilieLinwoodsLittle B HouseLittle младенца GrainsLittle BeanLittle BelliesLittle InnoscentsLittle KingdomLittle NeonatesLittle RoyalsLittle SasaLittle TikesLittle TreasureLittle treeLM MommyLock и LockLohasLong DragonLoopingLoshiLovariaLove EarthLove MummyLoveAmmeLovekinsLovemaeLoviLoviiaLox MalaysiaLucas PapawLuckyLucky BabyLuddyLunavieLuvable ДрузьяLuvana FortunaM и SMagchan MalaysiaMagf ormersMagic ForestMak KuntumMalishMaltoferMAMMamaMama Уход TeaMamabaoMamas и PapasMamawayMameyoMamma PalaceMaMom MilkboosterMamypokoMango TreeMarcus & MarcusMarigoldMarinaa MakesMarvellous FunMaxi CosiMaxillMaxShieldMaylee HomeMayu Детские WipesMayyaBabyMcCleanMe BooksMebbyMedelaMedermaMedexMedicosMedisanaMedklinnMega BloksMega Мы CareMeinkindMek Kembang BabyMelissa & DougMellowMemoirMennosatoMEOMerriesMerry NationMetaniumMicunaMiDeerMifoldMiimeowMiiuMilestone CardsMilk PlanetMilky BearMillyBMillyMallyMilo & GabbyMiltonMimijumiMimosaMIni AgeMini MeMini PinkMiniwareMinniechicMioSunshineMiwakoMLBMLILYMom Больше MilkMomamaMombellaMommaMommy HanaMommy ModernMommyJ Здоровый HomemadeMoonyMoorooMorinagaMorphy RichardsMother-KMotherfeelsMotherhoodMotor TownMotorolaMozzyMu’min JuniorMumsluvMunchkinMustelaMy DearMy KoolMy Маленький Пони veNBHNeato RoboticsNebiolinaNedyaNeepoNell & WellNeo GeoNeo HealarNestle CerelacNestle LactogenNestle LactogrowNestle LactokidNestle Mom & MeNestle NanNestle Nan ProNestle NANKID OptiproNestle NANKID Optipro HANestle Pre NanNeunersNextGenNick & NicNikudoNing SalmahNinja TurtlesNIVEANIVEA BABYNo BrandNohooNona RoguyNookumsNordic NaturalsNovaNova CalNovalacNovamilNovoplusNubyNuFeelNUKNunaNutroplexNuvitO’DailyOballObebeOffspring NaturalOgawaOhana HerbsOKIOld NavyOleh ElonaOmbacOMG! DealsOmnioOmoOnly OrganicOnnisoOnwardsOnya BabyOogaaOopsOpen BabyOra2OralmedicOrange HouseOrchard ToysOreganOrganique от Олинды SpringOrggaOriginal SproutOshKosh B’goshOsudaOtomoOwenOxo TotOyezOysterOzenPacific BabyPacific FoodsPacificaPalmer’sPampersPanadolParklonPasturePearheadPebblePediasurePeg-PeregoPelangiPeppa PigPerozinPet PetPetite CreationsPetite TroopersPharmatonPhilipsPhilips AventPhotobookPicardoPiccolo HousePigeonPipidoPipiPauPiyo PiyoPlay & GoPlay-DohPlaygroPlayground CafePlayskoolPoco NidoPoppyPororo ToysPortesPot из GoldPotette PlusPouchPrimePrince LionheartPrincetonProCareProliverinPufiesPuku MalaysiaPump ItPuraPureenPurelinePurellPuteripreneurQOOCQT Конфайнмента SarongQuinnyQuintonQV Бабыр & RRadiant Всего FoodRaffertys GardenRaycopRazbabyRecaroRed BowRed SealRedbootReiscareRelax BottlesRenewallifeRenovaRhinathiolRice ХаскРичеллРайли и ДекланРивадусRock Star BabyRocktak BabyROCSRothoRowcesRoyal Baby WorldRoyal Kiddy LondonRoyalcotRumble TuffRushRuuahRycomSalcuraSa luaSangobionSankyo ToysSanta Barbara Polo & Ракетки ClubSassi BabySassySassy Подарки и StationerySassy LycraSavorlifeSayang BB HouseScaneoScentosScottsSCRUBBBSesame StreetShabondamaShadezShapeeShineShnuggleShowaSigvarisSilli ChewsSimbaSimilacSimple DimpleSimple WishesSinocareSitsafeSixteen PetiteSkincodeSkiphopSmart gamesSmart TrikeSmectaSmith и NephewSmithsonianSnapkisSnow BearSNUGGbabySoapsoxSoffy PoffySoft SnugSoftLoveSogon SogonSolcoSoleafSoothiSophie La GirafeSound из FlowersSoy MasterSpace7Spalm8SparcoSpectraSPLATSPM GamesSpringBudsSquooshiSsalgwajaSuavinexSudocremSuffySumanggiSummer InfantSummertzSun TenSungtao SeafoodSunnoSunny LionSunperry KidsSunstar TonicSuriSuryaSustagenSusuk ManjaSuu BalmSuzuran BabySven в IslandSweet CherrySweet Сердце ParisSweet PeaSweetie BabySZFWTaf ToysTaihoyoTanameraTasneem NaturelTavoTC МальчикTeether JoyTen-M JourneyTerminusThe Code Rig Семья ФрутзиThe Green Board Game CoThe Jam TartThe North FaceThe Olive TreeThe Tropical Co.

Applaws (Аплаус) беззерновой для кошек «курица и ягненок 80 20%» (dry cat chicken with lamb)

Как выбрать сухой корм для собак?

А стоит ли заморачиваться по поводу корма?

Как выбрать сухой корм?

Основной и лечебный корм

Порода собаки

Размер

Вес

Возраст

Образ жизни

Классы сухих кормов для собак

Какие бренды входят в эконом-класс?

Какие бренды входят в премиум-класс?

Какие бренды входят в супер-премиум класс?

Какие бренды входят в класс холистик?

Что мы получаем в итоге?

applaws для взрослых собак паштет с лососем и

Applaws для взрослых собак паштет с лососем и овощами (150 гр)

Applaws для взрослых собак паштет с лососем и овощами (150 гр х 7 шт)

Applaws для взрослых собак паштет с курицей и овощами (150 гр)

Applaws для взрослых собак паштет с ягненком и овощами (150 гр)

Applaws для взрослых собак паштет с говядиной и овощами (150 гр)

Applaws для взрослых собак с курицей, лососем и овощами (156 гр)

Applaws для взрослых собак с курицей, лососем и овощами (156 гр х 12 шт)

Applaws для взрослых собак паштет с говядиной и овощами (150 гр х 7 шт)

Applaws для взрослых собак паштет с ягненком и овощами (150 гр х 7 шт)

Applaws для взрослых собак паштет с курицей и овощами (150 гр х 7 шт)

Applaws набор ламистеров для взрослых собак с курицей, ягненком и лососем 5 шт х 150 гр (1 уп)

Applaws Паштет для собак с лососем и овощами (150 г)

Applaws Паштет для собак с курицей и овощами (150 г)

Applaws для взрослых собак с курицей и рисом (156 гр)

Almo Nature Паштет для собак, с лососем (300 г)

Almo Nature Dog Daily Menu Bio Organic для взрослых собак паштет с лососем (300 гр)

Almo Nature Dog Daily Menu Bio Organic для взрослых собак паштет с лососем (100 гр)

Monge Fruit Dog для взрослых собак паштет с лососем и грушей (100 гр)

Monge Fruit Dog для взрослых собак паштет с лососем и грушей (100 гр х 32 шт)

Applaws для взрослых кошек с кусочками тунца и лососем в желе (70 гр х 16 шт)

applaws для взрослых собак с курицей лососем

Applaws для взрослых собак с курицей, лососем и овощами (156 гр)

Applaws для взрослых собак с курицей, лососем и овощами (156 гр х 12 шт)

Applaws набор ламистеров для взрослых собак с курицей, ягненком и лососем 5 шт х 150 гр (1 уп)

Applaws для взрослых собак паштет с лососем и овощами (150 гр)

Applaws для взрослых собак паштет с курицей и овощами (150 гр)

Applaws для взрослых собак с курицей и рисом (156 гр)

Applaws для взрослых собак паштет с лососем и овощами (150 гр х 7 шт)

Applaws набор ламистеров для взрослых кошек с курицей, ягненком и лососем 7 шт х 100 гр (1 уп)

Applaws для взрослых собак с курицей, овощами и рисом (156 гр х 12 шт)

Applaws для взрослых собак с курицей, овощами и рисом (156 гр)

Applaws для взрослых собак паштет с курицей и овощами (150 гр х 7 шт)

Applaws для взрослых собак с курицей, говяжьей печенью и овощами (156 гр)

Applaws для взрослых собак с курицей, ветчиной и овощами (156 гр х 12 шт)

Applaws для взрослых собак с курицей, говяжьей печенью и овощами (156 гр х 12 шт)

Applaws для взрослых собак с курицей, ветчиной и овощами (156 гр)

Applaws для взрослых собак с курицей и рисом (156 гр х 12 шт)

Applaws Adult Dog Small & Medium Breed Chicken Grainfree беззерновой для взрослых собак маленьких и средних пород с курицей и овощами (2 кг)

Applaws для взрослых собак паштет с ягненком и овощами (150 гр)

Applaws Паштет для собак с курицей и овощами (150 г)

Applaws для взрослых собак паштет с говядиной и овощами (150 гр)

программ для изучения состава и потока микробных сообществ на основе данных флюоресцентных отпечатков ДНК.

Введение

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Graton Rancheria поддержит продление налога SMART за счет взноса в размере 1 млн долларов

Быстрое знакомство

Speed-Dating

How To EV Train Fast in Pokemon Sword and Shield (Exploit)

РОЖДЕНИЙ — перевод на чешский

Чего мы не знаем о материнском молоке Кэти Хайнд

evidneerast

Купить в марте 20umbi — онлайн

alexxlab

Добавить комментарий Отменить ответ