Корм для кошек и собак
Наши четвероногие любимцы – собаки являются полноценными членами семьи. Они нуждаются во внимании, заботе, уходе и хорошем питании. Наш интернет магазин для собак предлагает широкий выбор товаров, начиная от сухих кормов и заканчивая одеждой, спальными местами и аксессуарами для них. Вся предлагаемая в наших каталогах продукция отечественных и импортных производителей полностью соответствует мировым стандартам качества. Наши товары экологически чистые, надежные и абсолютно безопасные. У нас можно найти все, что нужно вашему домашнему любимцу. Купить товары для собак в нашем интернет магазине очень просто. Достаточно лишь зайти на наш сайт, оформить заявку и ждать обратного звонка для уточнения деталей и места доставки покупки.Что представляют собой товары для собак?
Предлагаемые в нашем интернет магазине товары для собак удовлетворят пожелания даже самых требовательных клиентов. У нас есть широкий выбор:
- Сухих кормов, консерв и прочих лакомств;
- Средств по уходу за кожей, зубами, когтями;
- Собачьей косметики;
- Одежды и обуви;
- Игрушек;
- Спальных мест и переносок;
- Шлеек, ошейников, поводков, и пр.
Тем, кого интересуют дешевые товары для собак, интернет магазин предлагает посетить отдельный его раздел, где представлены недорогие повседневные вещицы и базовый корм для собак. В других каталогах представлена брендовая продукция ведущих производителей, работающих на рынке зооиндустрии. Если вам нужны товары для собак, интернет магазин дешево предлагает их вам купить, не выходя из дома.
Puffins сухой корм для кошек, мясо, рис и овощи
Описание
Этот сухой корм для кошек является полнорационным и подходит в качестве основного рациона. В состав корма Пуффинс входят мясные ингредиенты¸ а также злаки. В нашем интернет магазине представлено несколько вариантов корма Пуффинс с разными вкусами.
Богатый выбор корма с разными вкусами позволяет владельцам вносить разнообразие в привычный рацион своих питомцев. Вы также можете подобрать из большого ассортимента тот вид корма, который не будет надоедать вашей кошке и она с удовольствием будет есть его.
Состав
Злаки, мука из мяса птицы, мука мясная, жир животный пищевой, пульпа сахарной свеклы, куриный печеночный экстракт, дрожжи, соевое масло, таурин, минеральные вещества (цинк, медь, кобальт, железо, йод, калий, кальций, фосфор селен, магний), антиоксиданты, комплекс витаминов А, D3, Е, К, холин В4, никотиновая кислота В3, пантотеновая кислота В5, рибофлавин В2, тиамин В1, цианокобаломин В12, фолиевая кислота В9, биотин.
Свойства
Возраст
Взрослые (от 1 до 6 лет)
Пожилые (после 7 лет)
Вкус
Рис
Мясо
Овощи
Порода/размер
Для всех пород
Особенности
Полнорационный
Повседневный
Отзывы
Отзывов еще нет
Зоотовары оптом от производителя на индивидуальных условиях
Наполнители, пеленки и аксессуары
ЗооДом
Корма для кошек и собак
Proxвост, ProBalanсe, Lapka, Glance
Корма для кошек и собак
Ночной охотник, Herbax, Puffins, Puffins picnic, Верные друзья, Амурр
Корма для кошек и собак
Ем без проблем, Натуральная формула, Собачье счастье, Кошачье счастье, Дозор
Корма для кошек и собак
Зоогурман, BIG DOG, Smally dog, Большая миска, СпецМяс, МуррКисс
Корма для птиц и грызунов
Чика, Чика Био, Закрома
Товары для птиц, грызунов, морских обитаталей
Аквакулинар, Перрико, Мышильд
ДОКТОР ZOO
Корма для птиц и грызунов
Верные друзья
Ошейники и аксессуары для кошек и собак
Наша ручная работа
Osso Fashion
Аксессуары для кошек и собак
Пижон
Корма и лакомства для кошек и собак
ВкусВилл
Продукты :: PUFFINS-FOOD.COM
Продукты
Взрослые тупики с бараниной и рисом
Здоровая и счастливая собака? Блестящая и роскошная шерсть, исключительный мышечный тонус, здоровая кожа, зубы, суставы, яркие ясные глаза, обильный стул, игривость и счастье. Питание способствует такому идеальному состоянию. Основная задача — поддержание оптимального веса и хорошей кондиции, стойкого иммунитета и правильного пищеварения. Высокая усвояемость снижает усталость, истощение пищеварительной системы и улучшает уборку за собакой.Состояние стройности является определяющим фактором для более долгой и здоровой жизни.
Тупики взрослые с куриным мясом
Здоровая и счастливая собака? Блестящая и роскошная шерсть, исключительный мышечный тонус, здоровая кожа, зубы, суставы, яркие ясные глаза, обильный стул, игривость и счастье. Питание способствует такому идеальному состоянию. Основная задача — поддержание оптимального веса и хорошей кондиции, стойкого иммунитета и правильного пищеварения. Высокая усвояемость снижает усталость, истощение пищеварительной системы и улучшает уборку за собакой.Состояние стройности является определяющим фактором для более долгой и здоровой жизни.
Тупики Взрослые Макси
Собаки крупных пород всегда превосходно помогали людям. Они стали незаменимыми помощниками во многих ситуациях (на работе) благодаря своей силе, стойкости, преданности, отличному обонянию и легкой обучаемости. Гармония их тел и благородная внешность очевидна с первого взгляда. Блестящая роскошная шерсть, исключительная структура мышц, здоровая кожа, зубы, суставы, яркие ясные глаза, здоровый стул, игривость и счастье — все это особенно выделяется для крупных пород.
Тупики Юниор
Щенки очень требовательны к питанию. В течение первых 6 месяцев собаки растут наиболее быстрыми темпами, развивается пищеварительная система, иммунитет, скелет и суставы, формируются кожа и шерсть. Вместе со всеми этими крайними изменениями развития щенки испытывают стресс из-за прерывания грудного вскармливания, смены хозяина, смены зубов и вакцинации. К тому же вместимость их желудка очень мала. Следовательно, пища должна быть питательной и в то же время безопасной с точки зрения питания, чтобы покрыть все эти изменения.
Тупики Юниор Макси
Щенки очень требовательны к питанию. В течение первых 6 месяцев собаки растут наиболее быстрыми темпами, развивается пищеварительная система, иммунитет, скелет и суставы, формируются кожа и шерсть. Вместе со всеми этими крайними изменениями развития щенки испытывают стресс из-за прерывания грудного вскармливания, смены хозяина, смены зубов и вакцинации. К тому же вместимость их желудка очень мала. Следовательно, пища должна быть питательной и в то же время безопасной с точки зрения питания, чтобы покрыть все эти изменения.
Тупики Старшие
Чем старше собака, т.е. чем дольше она живет с нами, тем более драгоценной и незаменимой она становится для нас. Сила молодости может смириться со многими вещами, но по мере взросления собак, как и людей, начинают появляться проблемы со здоровьем.
В зависимости от породы определенные физические изменения, которые влияют на использование определенных пищевых ингредиентов, происходят примерно в 7-летнем возрасте и приводят к тому, что ваша собака более чутко реагирует на недостаток или избыток определенного питательного вещества.Девиз кормов для пожилых собак — «профилактика». Следовательно, правильная диета для пожилых собак служит той же цели, что и защитная прививка. Он может улучшить текущие проблемы со здоровьем, уменьшить или избавиться от симптомов заболеваний, снизить риск новых заболеваний и, что не менее важно, поддерживать оптимальную массу тела и физическое состояние.
Тупики Йоркшир
Йоркширские тупики: здоровая и счастливая собака? Блестящая и роскошная шерсть, исключительный мышечный тонус, здоровая кожа, зубы, суставы, яркие ясные глаза, обильный стул, игривость и счастье.В таком идеальном состоянии очень много участвуют в питании. Основная задача — поддержание оптимального веса и хорошей кондиции, стойкого иммунитета и правильного пищеварения. Высокая усвояемость снижает усталость, истощение пищеварительной системы и улучшает уборку за собакой. Состояние стройности является определяющим фактором для более долгой и здоровой жизни.
фактов о птицах-тупиках | Fratercula arctica
Факты о тупиках
- Prey
- Sandeel, Herring, Sprat
- Имя молодого
- Цыпленок
- Групповое поведение
- Интересный факт
- Может оставаться в воде до 2 минут!
- Расчетная численность популяции
- Уменьшение
- Самая большая угроза
- Охота и загрязнение
- Наиболее характерная особенность
- Яркий треугольный клюв
- Другое имя (а)
- Атлантический тупик, хохлатый тупик, рогатый тупик, конек носорога
- Размах крыльев
- 47 см — 63 см (18.5 дюймов — 24,8 дюйма)
- Инкубационный период
- 45 дней
- Возраст птенцов
- 2 месяца
- Среда обитания
- Морские и прибрежные районы
- Хищники
- Чайки, поморники, лисы
- Диета
- Плотоядные
- Образ жизни
- Общее название
- Тупик
- Количество видов
- 4
- Местоположение
- Северное полушарие
- Средний размер кладки
- 1
- Слоган
- Может оставаться в воде до 2 минут!
- Группа
- Птица
Физические характеристики тупика
- Цвет
- Тип кожи
- Перья
- Максимальная скорость
- 55 миль в час
- Продолжительность жизни
- 15-30 лет
- Вес
- 368.5 г — 481,9 г (13 унций — 17 унций)
- Высота
- 28 см — 32 см (11 дюймов — 12,6 дюйма)
- Возраст половой зрелости
- 4-5 лет
Изображения тупиков
Просмотрите все наши изображения тупиков в Галерея.
Посмотреть все изображения Puffin!
Классификация и эволюция тупиков
Тупики — это небольшой вид морских птиц, который тесно связан с другими птицами, такими как кайры. Существует четыре различных вида тупиков, обитающих в более холодных условиях северной Атлантики: атлантический тупик, тафтинговый тупик, рогатый тупик и конек-носорог, которые, несмотря на свое название и разный внешний вид, остаются одним из четырех видов тупиков в мире. существование сегодня.Тупики, наиболее известные своими ярко окрашенными треугольными клювами, являются одними из самых характерных среди всех морских птиц, и хотя они не считаются вымирающим видом, тупики вымерли во многих районах, где они когда-то были в изобилии. Несмотря на свою пингвиноподобную стойку и внешний вид, тупики могут очень хорошо летать и, как известно, за короткие периоды времени развивают скорость более 50 миль в час.
Анатомия и внешний вид тупиков
Тупики — это птицы небольшого размера с густым черно-белым оперением, которое помогает им согреться в холодных условиях самого северного, северного полушария.У них черные шеи, спина и крылья с белым низом и беловатыми перьями по бокам лица. Их ступни и ноги имеют тускло-желтый цвет в холодные зимние месяцы, а в период размножения становятся ярко-оранжевыми. Тупики — это птицы с широкими уплощенными клювами, большими и треугольными по форме, хорошо известными своими яркими отметинами. Красный цвет проходит по всей длине и поперек кончика, основание более сероватого цвета с промежуточными желтыми отметинами, и так же, как их ноги и ступни, клюв тупиков более ярко окрашен в теплый период размножения, становясь более ярким. скучнее, чем в более холодные зимние месяцы.Хотя и самцы, и самки почти идентичны по внешнему виду, самцы, как правило, немного больше по размеру, чем их коллеги-самки, и поэтому их легче идентифицировать, когда оба пола видны вместе.
Распространение и среда обитания тупиков
Тупики — это птицы, обитающие в море и прибрежных районах Северного полушария, чаще всего в Атлантическом, Тихом и некоторых частях Полярного круга. Точное местонахождение тупика в значительной степени зависит от вида: атлантический тупик населяет береговую линию по всей северной части Атлантического океана, от Дании на востоке до Канады на западе и от северной Норвегии до Канарских островов и Испании. на юге, но не в северной части Тихого океана.Тем не менее, хохлатый тупик и рогатый тупик отсутствуют в Северной Атлантике, а вместо этого могут быть найдены в больших колониях в северной части Тихого океана от западного побережья Канады до Японии и, возможно, даже Кореи, хотя их статус там не известен. Несмотря на то, что популяции во многих регионах по-прежнему остаются стабильными, тупики сегодня отсутствуют на большей части их некогда обширного естественного ареала, и им постоянно угрожает рост активности человека как на суше, так и в море, где им особенно угрожают экологические катастрофы. например, разливы нефти.
Поведение и образ жизни тупиков
Как и другие виды гагарок (и многие другие морские птицы), тупики — очень общительные животные, обитающие на травянистых вершинах скал обширными колониями, которые могут содержать до двух миллионов особей. Однако известно, что они держатся вместе не только на суше: когда они кормятся в море, тупики, как известно, образуют «плоты», чтобы обеспечить лучшую защиту от своих многочисленных хищников благодаря технике безопасности в числа.Тупики не только быстрые и эффективные в воздухе, но и невероятно искусные и ловкие пловцы, которые, как известно, ныряют на глубину до 60 метров на две минуты за раз (хотя в среднем погружение обычно длится около 20 минут. секунд), чтобы максимизировать свои шансы поймать много рыбы как для себя, так и для своего потомства. В зимние месяцы тупики проводят большую часть своего времени, охотясь в море, иногда за много миль от суши, прежде чем вернуться к скалам в теплые месяцы для размножения, что затрудняет для ученых полное понимание статуса вида.
Размножение и жизненные циклы тупиков
Тупики имеют ежегодный сезон размножения, который длится в теплые летние месяцы с апреля до середины августа, в больших колониях на мягких травянистых вершинах скал. Используя свои клювы как лопату и перепончатые лапы с острыми когтями для выкапывания нежелательной почвы, они могут вырывать в земле норы глубиной более метра и длиной более нескольких метров, чтобы сохранить свои ценные вещи. яйцо или детеныш надежно спрятаны от хищников, например чаек.Тупики спариваются на всю жизнь, и самка тупика откладывает одно белое яйцо, которое оба родителя инкубируют до тех пор, пока через шесть недель оно не вылупится в норе, покрытое коричневатыми перьями. За птенцом ухаживают и кормят оба родителя, которые приносят ему рыбу из моря в своих клювах, пока он не станет самостоятельным и не покинет гнездо в возрасте около двух месяцев. Тупики способны воспроизводить себя в возрасте от четырех до пяти лет и могут жить до 20 лет в дикой природе, хотя пожилые люди не являются чем-то необычным, а некоторые люди достигают возраста тридцати лет.
Диета тупиков и добыча
Несмотря на то, что тупики технически всеядны, их рацион исключительно плотоядный, в основном состоящий из мелких рыб и дополненный животным планктоном в холодные зимние месяцы. Тупики в основном охотятся на сандиля, мойву, сельдь и кильку, а также иногда на кальмаров, моллюсков или ракообразных, на которых они охотятся под водой во время погружений, которые в среднем составляют около 20 секунд за раз. Их клювы уникальной формы также идеально подходят для переноски рыбы благодаря слою шипов, которые находятся в верхней части клюва и на их языке.Тщательно вылавливая мелкую рыбу, расположенную от головы до хвоста по всей длине клюва, тупики могут продолжать ловить еще больше, не теряя ни одного улова, который они уже накопили, обычно собирая до 30 рыб, прежде чем вернуться обратно. землю, чтобы накормить своего голодного птенца.
Puffin Predators and Threats
Несмотря на то, что тупики относительно невелики по размеру, у них меньше хищников, чем ожидалось, из-за того, что они гнездятся высоко на вершинах скал и в норах, расположенных более чем на 3 фута под землей, с чайками и ястребами , орлы и лисы — самые обычные наземные хищники взрослых тупиков и их детенышей.В районах, более близких к человеческому жилищу, тупики также становятся жертвами домашних кошек и собак, а крысы часто целятся в их ценные яйца, спрятанные в норах под землей. В море тупики становятся добычей крупных птиц, таких как поморники и большие чайки, которые соревнуются за ту же пищу, на которую охотятся тупики. Однако наибольшую угрозу для тупиков сегодня представляют люди и влияние, которое их активная деятельность оказывает на естественную среду обитания тупиков. Развитие прибрежных районов, туризм, разливы нефти и появление чужеродных хищников в их естественной среде обитания привело к резкому сокращению численности популяции во всем их исторически обширном естественном ареале.
Puffin Интересные факты и особенности
Puffin — отличные пловцы, но они также невероятно быстры в воздухе и могут очень быстро запускаться с земли или воды, когда это необходимо. Тупики настолько быстры, что могут летать со скоростью до 55 миль в час (88 км / ч) в течение коротких периодов времени, а их маленькие крылышки взмахивают до 300-400 раз в минуту. Тупиков часто можно увидеть с рядами маленьких рыбок, выстроенными в линию по длине их ярко окрашенных треугольных клювов, особенно во время сезона размножения, когда они ловят рыбу, чтобы накормить своих молодых птенцов.Посещение нерестилищ на расстоянии до 10 км часто может быть утомительным процессом для такой маленькой птицы, поэтому они обычно собирают столько рыбы, сколько могут за один присест. Хотя обычно известно, что они приносят от 4 до 30 мелких рыб, таких как песчаные угри, у одной особи было зарегистрировано целых 62 рыбы, запихнутых в клюв.
Отношения тупиков с людьми
С тех пор, как люди заселили самые северные регионы мира, они охотились на тупиков ради мяса и яиц, чтобы обеспечить людей легким источником белка в теплые летние месяцы, когда птицы гнездо на суше.Однако с ростом числа жителей популяции начали сильно страдать, что привело к исчезновению многих колоний тупиков по всему Северному полушарию. Люди также сыграли огромную роль в нарушении их естественной среды обитания в целом за счет увеличения объемов прибрежного освоения и чрезмерного туризма, который приносит меньше земли и больше мусора, с которым этим маленьким птицам приходится бороться. Другой серьезной проблемой было воздействие рыболовства, которое привело к серьезному сокращению естественной добычи видов тупиков, и это в сочетании с повышенной активностью океана и, что еще более разрушительно, разливами нефти привело к полному исчезновению тупиков во многих регионах, где они когда-то были найдены. избыток.
Состояние сохранения и жизнь тупиков сегодня
Сегодня считается, что все четыре вида тупиков в наименьшей степени опасаются исчезновения в ближайшем будущем из их естественной среды обитания, поскольку, хотя популяции все еще сокращаются, их численность остается относительно высокой, и они все еще занимают большой ареал по всему Северному полушарию, хотя им особенно угрожает загрязнение. Разливы нефти с больших танкеров являются одним из самых опасных загрязнителей для тупиков, поскольку они легко застревают в густой нефти и покрываются ею, и поэтому не могут летать или плавать.В 1800-х и 1900-х годах на тупиков обычно охотились из-за мяса и яиц, что привело к серьезному сокращению популяции тупиков в мире, даже полностью уничтожив некоторые колонии тупиков. Однако в 21-м и конце 20-го века тупики получили лучшую защиту, и ведутся работы по сохранению, особенно в Северной Америке, чтобы помочь спасти оставшиеся популяции тупиков.
Просмотреть все 64 животных, имя которых начинается с PЧасто задаваемые вопросы о тупиках (часто задаваемые вопросы)
Тупики являются травоядными, плотоядными или всеядными?
Тупики — хищники, то есть они едят других животных.
Какому королевству принадлежат тупики?
Тупики принадлежат Королевству Животных.
К какому классу принадлежат тупики?
Тупики относятся к классу Авес.
К какому типу принадлежат тупики?
Тупики относятся к типу Chordata.
К какому семейству принадлежат тупики?
Тупики принадлежат к семейству Alcidae.
К какому отряду принадлежат тупики?
Тупики относятся к отряду Charadriiformes.
Какое покрытие у тупиков?
Тупики покрыты перьями.
К какому роду принадлежат тупики?
Тупики относятся к роду Fratercula.
Где живут тупики?
Тупики обитают в Северном полушарии.
В какой среде обитания живут тупики?
Тупики обитают в морских и прибрежных районах.
Какие хищники тупики?
Хищники тупиков включают чаек, поморников и лисиц.
Сколько яиц откладывают тупики?
Тупики обычно откладывают 1 яйцо.
Что интересного в тупиках?
Тупики могут оставаться в воде до 2 минут!
Каково научное название тупика?
Научное название тупика — Fratercula arctica.
Какова продолжительность жизни тупика?
Тупики могут жить от 15 до 30 лет.
Как называют детеныша тупика?
Детёныша тупика называют птенцом.
Сколько существует видов тупиков?
Существует 4 вида тупиков.
Какая самая большая угроза для тупиков?
Самыми большими угрозами для тупиков являются охота и загрязнение окружающей среды.
Какой размах крыльев у тупика?
Размах крыльев тупика составляет от 47 до 63 см (от 18,5 до 24,8 дюйма).
Как еще зовут тупика?
Тупик также называют атлантическим тупиком, тупиком с хохолком, рогатым тупиком или коньком-носорогом.
Как быстро тупик?
Тупик может двигаться со скоростью до 55 миль в час.
Как рождаются тупики?
Тупики откладывают яйца.
Как сказать Puffin в …
BulgarianТъпоклюна кайраCzechPapuchalk bělobradý
SpanishFratercula агсНса
EsperantoAtlantika fraterkulo
ItalianFratercula агсНса
японский Мнение Эксперта シ ツ ノ メ Немецкий リ
TurkishBayağı дениз papağanı
Источники
- Дэвид Burnie, Дорлинг Киндерсли (2011) Animal, The Definitive Визуальный Guide К дикой природе мира
- Том Джексон, Lorenz Books (2007) Всемирная энциклопедия животных
- Дэвид Берни, Зимородок (2011) Энциклопедия животных зимородка
- Ричард Маккей, University of California Press (2009) Атлас исчезающих видов
- Дэвид Берни, Дорлинг Киндерсли (2008) Иллюстрированная энциклопедия животных
- Дорлинг Киндерсли (2006) Энциклопедия животных Дорлинга Киндерсли
- Кристофер Перринс, Oxford University Press (2009) Энциклопедия птиц
- Информация об атлантическом тупике, доступна здесь : // www.iucnredlist.org/details/106003321/0
- Информация о хохлатом тупике, доступна здесь: http://www.iucnredlist.org/details/106003323/0
- Информация о рогатом тупике, доступна здесь: http://www.iucnredlist. org / details / 106003322/0
- Факты о тупиках, Доступно здесь: http://projectpuffin.audubon.org/puffin-faqs
Анализ пищевой цепи морских птиц в северной части залива Мэн на основе ДНК
Abstract
Взаимодействие хищник-жертва в пищевых цепочках используется как для характеристики, так и для понимания экосистем.Обычные методы построения пищевых цепочек на основе визуальной идентификации добычи в рационе хищников могут страдать от плохого таксономического разрешения, неправильной идентификации и предвзятости в отношении мелкой или полностью перевариваемой добычи. Технология секвенирования следующего поколения (NGS) стала мощным инструментом для реконструкции диеты посредством штрих-кодирования ДНК в содержимом желудка или образцах фекалий. Здесь мы используем мультилокусное (16S и CO1) секвенирование следующего поколения штрих-кодов ДНК в фекалиях атлантического тупика ( Fratercula arctica ) цыплят (n = 65) и взрослых (n = 64) и содержимого желудков их основных добыча, атлантическая сельдь ( Clupea harengus , n = 44) для исследования ранее изученной пищевой цепи.Мы сравнили обычную диету цыплят и диету, полученную из молекулярных источников, проверили сходство между диетами взрослых тупиков и цыплят и определили, можно ли обнаружить добычу сельди в образцах рациона тупиков. Между маркерами 16S и CO1 наблюдалась высокая вариабельность охвата групп добычи. Мы идентифицировали более уникальную жертву с помощью нашего 16S по сравнению с маркерами штрих-кодирования CO1 (51 и 39 таксонов соответственно), при этом только 12 таксонов были идентифицированы обоими генами. Мы не обнаружили существенной разницы между рационами взрослых тупиков (n = 17) и цыплят (n = 41), идентифицированных 16S.Наш молекулярный метод более систематизирован и обнаруживает добычу цыплят с большей частотой, чем обычные полевые наблюдения. Многие вероятные планктонные жертвы сельди были обнаружены в фекалиях взрослых тупиков и цыплят, что подчеркивает влияние вторичного потребления на интерпретацию молекулярного анализа питания. Это исследование представляет собой первое одновременное молекулярное исследование рациона нескольких компонентов пищевой цепи и подчеркивает полезность подхода с несколькими локусами для реконструкции рациона, который широко применим для анализа пищевых сетей.
Образец цитирования: Bowser AK, Diamond AW, Addison JA (2013) От тупиков до планктона: ДНК-анализ пищевой цепи морских птиц в северной части залива Мэн. PLoS ONE 8 (12): e83152. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0083152
Редактор: Адам Стоу, Университет Маккуори, Австралия
Поступило: 4 августа 2013 г .; Одобрена: 30 октября 2013 г .; Опубликовано: 16 декабря 2013 г.
Авторские права: © 2013 Bowser et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Финансирование: Эта работа финансировалась NSERC, Министерством охраны окружающей среды Канады, Канадской службой дикой природы (Атлантический регион), Университетом Нью-Брансуика, Фондом инноваций Нью-Брансуика и Канадским фондом инноваций. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.
Введение
Экосистемы характеризуются и понимаются на основе фундаментальных отношений между хищником и жертвой. Когда они связаны вертикально и горизонтально, эти отношения образуют пищевые сети, которые показывают, как энергия течет через экосистемы, и демонстрируют, как взаимодействуют различные компоненты сети. Рассмотрение экосистемы в целом, а не просто совокупности независимых частей, является краеугольным камнем широко принятой парадигмы экосистемного управления [1,2,3,4,5,6,7], которая опирается на точные оценки пищевых сетей.Поскольку наше понимание функционирования экосистемы зависит от данных в пищевой цепи, устаревшие, предвзятые или неполные оценки рациона питания ослабляют нашу способность предсказывать, как и почему происходят изменения в экосистемах.
Традиционные методы построения пищевых цепочек основаны на исследованиях диеты, которые визуально идентифицируют добычу во время кормления или в желудках, гранулах или фекалиях. Эти методы часто страдают от неправильной идентификации похожей на вид добычи, недопредставленности мягкотелой (внутри содержимого желудка) или мелкой (при наблюдении в поле) добычи и низкого таксономического разрешения, когда добычу невозможно точно идентифицировать из-за расстояния (во время наблюдений ) или пищеварение (в содержимом желудка) [8].Биохимические методы, такие как жирные кислоты, стабильные изотопы и ДНК, приобрели популярность в исследованиях диет и могут использоваться как форма контроля качества для традиционных методов. Однако эти методы позволяют лучше понять диету в долгосрочной перспективе и не обязательно хорошо подходят для определения вида добычи, особенно когда имеется мало a priori знаний о диете. Использование ДНК в фекалиях или содержимом желудка дает представление о рационе хищника и, как было показано, не только дает более точную оценку рациона, чем традиционные методы [9,10,11,12], но также может обеспечить идентификацию добычи на уровне вида. за счет использования общедоступных справочных последовательностей.Методики, основанные на ДНК, выгодны тем, что их можно использовать либо для сравнительных целей для ранее известных диет, либо для описания диеты de novo .
Применение штрих-кодирования ДНК в исследованиях диеты значительно расширилось с появлением технологии секвенирования следующего поколения (NGS). Теперь возможно идентифицировать даже самую редкую жертву от нескольких хищников до уровня вида, рода или семейства за один цикл секвенирования, сохраняя при этом возможность проследить каждую жертву до образца, из которого она произошла.NGS использовался в исследованиях диет по штрих-кодированию для морских котиков [13], маленьких пингвинов [14,15], медленных червей [16], летучих мышей [17,18], леопардовых кошек [19] и тапиров [20]. Однако на идентификацию добычи по ДНК в образцах рациона могут сильно влиять технические проблемы, включая неопределенность в отношении таксономического разнообразия, ожидаемого в образце, и низкое качество геномной ДНК, особенно при извлечении из образцов фекалий. Большинство исследований диеты на основе ДНК разрабатывают несколько групповых праймеров, которые усиливают различные типы добычи в рационе хищников, но эти исследования могут не описать полный таксономический диапазон потребляемой добычи.Универсальные праймеры могут амплифицировать и разрешать виды в широком спектре таксонов, что делает их хорошей, экономичной и эффективной по времени альтернативой группоспецифичным праймерам. Использование нескольких маркеров также может обеспечить более широкое таксономическое разрешение диеты, поскольку разные маркеры не подходят для штрих-кодов для всех таксономических групп (например, 21). Кроме того, ПЦР-амплификация деградированной ДНК более надежна, когда целевые фрагменты малы [22]. Более того, до 90% последовательностей, полученных из NGS [19], могут быть менее деградированной ДНК хозяина.Включение праймеров для блокирования амплификации ДНК хозяина может значительно увеличить количество жертвенных последовательностей. Наконец, также возможно, что результаты могут вводить в заблуждение, если праймеры могут усиливать добычу внутри добычи, которой питаются хищники (т. Е. Вторичное потребление). Это может исказить интерпретацию того, как эти виды взаимодействуют с остальной экосистемой. Таким образом, сравнение рациона как хищника, так и жертвы является оправданным для оценки возможности обнаружения вторичного потребления методами, основанными на ДНК.На сегодняшний день ни в одном исследовании диеты с использованием NGS не было изучено несколько компонентов пищевой цепи.
Здесь мы используем атлантических тупиков ( Fratercula arctica ) с острова Макиас Сил и их главную добычу, атлантическую сельдь ( Clupea harengus ) в качестве модельной системы, чтобы исследовать, как можно использовать молекулярные методы для описания пищевых цепей, как эти два вида представляют простая пищевая сеть, в которой использовались два традиционных метода изучения диеты. Диета цыплят тупиков известна благодаря сотням часов наблюдений за взрослыми особями, которые кормят своих птенцов в рамках долгосрочной программы исследования морских птиц [23], которая позволит сравнить рацион цыплят, полученный на молекулярном уровне.Изучая рацион основной добычи тупиков (сельди), мы также можем рассмотреть потенциальный эффект вторичного потребления. Молекулярные методы также могут пролить свет на вопросы, на которые исторически было сложно или невозможно ответить. Например, поскольку взрослые тупики добывают корм в море и не оставляют идентифицируемых компонентов добычи в фекалиях или в форме гранул, рацион цыплят использовался в качестве наилучшей оценки рациона взрослых птиц в заливе Мэн, что подтверждается предположением. сходными уровнями изотопов азота в крови цыплят и взрослых (одинаковое трофическое положение) [24].Однако теория оптимального кормления предсказывает, что взрослые тупики, занимающиеся добычей кормов в центре, должны кормить своих птенцов менее разнообразным рационом из высококачественной пищи, в то время как они питаются более разнообразным ассортиментом потенциально более низкого качества добычи [25]. Анализ диетических образцов фекалий на основе ДНК дает возможность задокументировать диету взрослых тупиков в заливе Мэн и проверить сходство диеты взрослых особей и цыплят. Кроме того, диета основной добычи цыплят тупиков (молоди сельди) не очень хорошо известна и основана на пяти анализах содержимого желудков в возрасте старше 30 лет [26,27,28,29,30].Диета из сельди, полученная из молекулярных источников, позволяет одновременно оценивать обычный анализ содержания желудка в рационе, расширяя наши знания о важной экосистеме.
В этой статье мы применяем секвенирование следующего поколения штрих-кодов ДНК по двум генетическим маркерам на образцах фекалий взрослых тупиков и цыплят, а также содержимого желудков сельди для изучения рациона и описания пищевой цепи, в которой существуют эти виды. Мы сравниваем рацион цыплят тупиков, используя обычные полевые наблюдения и молекулярные методы, проверяем предположение об общем рационе взрослых тупиков и цыплят и проверяем влияние вторичного потребления, рассматривая рационы цыплят и сельди.Кроме того, мы используем виды добычи, обнаруженные каждым генетическим маркером в образцах рациона, для оценки эффективности метода нескольких локусов, а также для того, чтобы сделать выводы об экологии кормодобывания тупиков и сельди. Поскольку пищевые сети обеспечивают основу, на основе которой мы делаем выводы о том, как функционирует экосистема, крайне важно, чтобы исследования, используемые для построения пищевых сетей, обеспечивали наиболее точную, непредвзятую и повторяемую оценку диеты. В этой статье представлен первый анализ нескольких генетических маркеров для нескольких таксонов в морской трофической сети и продемонстрирована широкая применимость этого метода в качестве инструмента для реконструкции рациона рыб и птиц.
Методы
Заявление об этике
Это исследование было одобрено Комитетом по уходу за животными Университета Нью-Брансуика (разрешение на уход за животными № 09012), а также Канадской службой дикой природы (разрешение на научное исследование № ST2642 для работы с тупиками и MBS / MSI 09-6 для беспокойных птиц в охраняемый, находящийся в федеральной собственности заповедник перелетных птиц).
Отбор проб
Чтобы оценить эффективность традиционных полевых наблюдений в качестве подходящего метода для изучения рациона тупиков, мы сравнили диету, рассчитанную на основе 68 часов полевых наблюдений и по ДНК в образцах фекалий цыплят тупиков в период размножения 2009 г. (май-август) на Макиасе. Остров Сил (44 ° 30 ‘северной широты, 67 ° 6’ западной долготы), Нью-Брансуик, Канада.Полевые наблюдения проводились в течение трех часов в бинокль через смотровые шторы в соответствии с протоколами исследований острова Макиас Сил [23,31], где количество, длина и вид или категория (например, «криль») всей добычи регистрировались в каждой загрузке счета. доставка взрослого снабженца. В ходе регулярных исследовательских работ случайно был собран 91 образец фекалий цыплят. Чтобы проверить сходство рациона взрослых тупиков и цыплят, мы собирали 10 образцов фекалий взрослых особей в неделю (всего 146) в течение всего сезона.Образцы фекалий хранили в 70% этаноле. Чтобы оценить рацион сельди и изучить потенциальный эффект вторичного потребления, мы вскрыли желудки 77 собранных молодых особей сельди (~ 5-15 см), которые случайно выпали во время кормления взрослых морских птиц. Другая добыча, обнаруженная в колонии, а также несколько видов беспозвоночных и рыб, полученных из приливной зоны острова и из мусорных ведер, подаренных проходящими рыбаками, хранились в мешках Whirl-pak® (Nasco) при -20 ° C для создания последовательности база данных местной фауны, по которой можно идентифицировать фекальную и желудочную ДНК.Все образцы фекалий и содержимое желудка хранили в 5-10 мл 70% этанола при 4 ° C в течение трех месяцев, -20 ° C в течение четырех месяцев и затем -80 ° C в течение двух лет.
Дизайн грунтовки
Короткие ампликоны-мишени предпочтительны для анализа молекулярной диеты на основе ПЦР, потому что фекальная ДНК часто сильно разложена [22,32]. Мы использовали универсальные пары праймеров для нацеливания на небольшие (~ 130-300 п.н.) фрагменты митохондриальных генов 16S и субъединицы 1 оксидазы цитохрома c (CO1). Вырожденные праймеры 16S1F и 16S2R амплифицируют область 16S размером ~ 180-270 пар оснований и, как было показано, амплифицируют ДНК жертвы из фекалий пингвинов (например,г., рыба, эвфаузииды, кальмары [12]). Чтобы дополнить эти данные, мы использовали второй набор универсальных праймеров [33], которые успешно амплифицируют область CO1 длиной 130 пар оснований у более чем 600 видов млекопитающих, рыб, птиц и насекомых, что делает его хорошим кандидатом для обнаружения видов, не амплифицированных с помощью 16S (таблица 1).
Праймеры | Последовательность 5′-3′ | Ссылка | ||
---|---|---|---|---|
16S1F | GACGAKAAGACCCTA | GACGAKAAGACCCTA | 90CCTG 484 GACGAKAAGACCCTA | 9048 GACGA Это исследование |
16S2R | CGCTGTTATCCCTADRGTAACT | [12] | ||
Пуффин Блокатор | CCCTGGGGTAGCT TGGTCCATTGATCC3 | Это исследование | ||
Uni-MinibarF1 | TCCACTAATCACAARGATATTGGTAC | [33] | ||
Uni-MinibarR1 | GAAAATCATAATGAAGGCATGAGC | [33] |
Таблица 1.Универсальные праймеры для генов 16S и CO1 с соответствующими блокирующими праймерами.
Мы использовали объединенный метод массового параллельного секвенирования (MPS), следуя протоколу Puritz et al. [34]. Чтобы обеспечить возможность восстановления идентификации образца из данных последовательности, мы включили тег мультиплексного идентификатора (MID) на 10 пар оснований между адаптером секвенирования Lib-L 454 (26 пар оснований плюс ключ калибровки сигнала 4 пар оснований) и универсальным праймером (16S или CO1) в нашу специально разработанную перспективу. и обратные праймеры (таблица 2).
Lib-L 454 Секвенирование Адаптеры и ключа (5′-3′ ) | ||||||||||
Форвард CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACtcag | ||||||||||
Обратный CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTCtcag | ||||||||||
мультиплексной Идентификатор Теги ( 5′-3 ‘) | ||||||||||
MID-1 | ACGAGTGCGT | |||||||||
MID-2 | ACGCTCGACA | |||||||||
MID-3 | AGACGCACTC | |||||||||
AGACGCACTC 9047 | MID-5 | ATCAGACACG | ||||||||
MID-6 | ATATCGCGAG | |||||||||
MID-7 | CGTGTCTCTA | |||||||||
MID-8 | CGT | MID-10 | TCTCTATGCG | |||||||
MID-11 | TGATACGTCT | |||||||||
TACTGAGCTA | ||||||||||
MID-13 | CATAGTAGTG | |||||||||
MID-14 | CGAGAGATAC | |||||||||
MID-15 | MID-15 | ATACGAC 9048 |
Таблица 2.Адаптеры секвенирования нового поколения (454) и теги MID, используемые при разработке праймеров для секвенирования.
Образцы желудка и фекалий могут содержать значительное количество ДНК вида-хозяина из-за отторжения клеток пищеварительного тракта [19]. ДНК хозяина может составлять огромную долю от общего числа последовательностей, полученных в результате секвенирования, что снижает возможность обнаружения жертвы с помощью небольшого количества ДНК или ДНК, которую трудно амплифицировать [19]. Предварительное секвенирование клонированных продуктов ПЦР 16S показало высокую частоту последовательностей ДНК хозяина, извлеченных как из образцов желудка, так и из фекалий.Таким образом, мы сконструировали праймеры, блокирующие селедку и тупик, для 16S1F и 16S2R (соответственно), используя метод спейсера C3, описанный Вестхеймом и Ярманом [35] (Таблица 1). Эффективность блокирующего праймера тестировали с ДНК тупика и сельди по отдельности и в конкурентных условиях в реакциях ПЦР, состоящих из смесей ДНК жертвы (наши эталонные образцы) и ДНК хищника (тупик или сельдь). Хотя мы не выявили интерференции между блокирующими праймерами и какими-либо из наших контрольных образцов, возможно, что блокирующий праймер (перекрывающий высококонсервативную область ДНК) препятствовал идеальной амплификации типов жертв, которые мы не могли оценить.Блокирующие праймеры использовали с амплификациями 16S при соотношении блокирующих и универсальных праймеров 5: 1. Использование блокирующего праймера для обогащения образцов геномной ДНК для матриц редкой добычи снизило долю последовательностей сельди на 86% и удвоило количество идентифицированных таксонов (с 10 до 20 таксонов) в тесте восьми 16S-амплифицированного содержимого желудка сельди. (данные не показаны).
Экстракция и амплификация ДНК
ДНКиз содержимого желудка и контрольных образцов выделяли по протоколу CTAB [36].ДНК ресуспендировали в 20-100 мкл TE (Ambion pH 8,0), и концентрацию и чистоту оценивали с помощью Nanovue TM (General Electric Life Sciences). Образцы фекалий центрифугировали в течение 30 минут при 4 ° C и сливали этанол для хранения. ДНК экстрагировали с помощью мини-набора QiaAmp DNA Stool Mini (Qiagen). Образцы с небольшим количеством фекального материала элюировали 75-100 мкл буфера AE вместо рекомендованных 200 мкл. ДНК хранили в 2 мл микроцентрифужных пробирках при -20 ° C.
Амплификация фекальной ДНК с помощью праймеров для секвенирования, меченных 16S MID, была достигнута в 30 мкл реакций, содержащих 6 мкл неразбавленной матрицы, 0.2 мМ dNTP, 1X бычий сывороточный альбумин (BSA; New England Biolabs), 5 мМ MgSO4, 0,25 мкМ каждого праймера и 1,25 блокирующего праймера, 1X High Fidelity Buffer и 1,2 единицы Platinum® Taq DNA Polymerase High Fidelity (Life Technologies). ДНК из содержимого желудка рыб амплифицировали с помощью праймеров для секвенирования с 16S MID в 30 мкл реакций, содержащих 3 мкл неразбавленной матрицы, 0,2 мМ dNTP, 5 мМ MgSO4, 0,25 мкМ каждого праймера, 1,25 мкМ блокирующего праймера, 1X High Fidelity Buffer и 1,2 единицы платины ® Taq ДНК-полимераза высокой точности.ДНК из образцов, предназначенных для эталонной базы данных потенциальной жертвы, амплифицировали с 10 нг матрицы, 0,2 мМ dNTP, 0,5 мМ MgSO4, 0,25 мкМ каждого прямого и обратного праймера 16S, 0,04 единиц ДНК-полимеразы Taq и 1X буфером ThermoPol (Новая Англия). Биолаборатории). Протокол термоциклирования для 16S начинался при 94 ° C в течение 10 минут, затем следовали 35 циклов при 94 ° C в течение 15 секунд, 55 ° C в течение 15 секунд и 68 ° C в течение 30 секунд, с последующим продлением до 68 ° C в течение 5 минут (BioRad C -1000).
Амплификация с CO1 для обоих типов образцов проводилась с аналогичными компонентами и условиями цикла, что и для 16S, со следующими модификациями: использовалась 3 мкл неразбавленной матрицы, BSA не добавлялся, блокирующий праймер отсутствовал, а температура отжига была установлена на 53 ° C.Все ампликоны визуализировали в УФ-свете в 2% агарозе с использованием SYBR Safe (Life Technologies), а амплифицированные ампликоны очищали с помощью Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter) при соотношении 0,9 гранул к 1 продукту ПЦР. Концентрацию ДНК определяли с помощью анализов dsDNA BR на флуорометре Qubit 2.0 (Life Technologies). ПЦР повторяли для образцов с менее чем 20 нг 16S-амплифицированной ДНК, затем объединяли после очистки с помощью набора для экстракции геля QIAEX II в соответствии с инструкциями производителя.
Все пипетки выполнялись с помощью защитных наконечников, отрицательные контроли использовались в каждой ПЦР, использовались небольшие аликвоты реагентов, а лабораторные столы очищались между применениями.Образцы рациона взрослых особей, цыплят и сельди были экстрагированы в разные дни, за несколько недель до ПЦР-компонента этого проекта.
Мы приложили значительные усилия для получения достаточного количества и равномерного временного распределения выборок на протяжении всего периода выборки. Однако ограничивающим шагом в нашем протоколе было выделение ДНК высокого качества. Успешность амплификации содержимого желудков сельди и фекалий тупиков варьировала от 47% до 71%. Недостаточная гомогенизация во время экстракции ДНК и ингибиторы ПЦР — два возможных объяснения большого количества образцов, которые не удалось успешно амплифицировать с помощью ПЦР.Также наблюдались значительные различия в охвате выборкой. Хотя успешность секвенирования представленных образцов составляла более 94%, только 61–84% из этих образцов дали достаточное количество последовательностей для включения в расчеты частоты встречаемости (см. Следующий раздел). Эта вариация может быть результатом вызванной MID-меткой смещения амплификации и секвенирования [37], неточности в эквимолярном пуле ампликонов или вариабельности в качестве образца (поскольку образцы фекалий и желудков, вероятно, содержат много ингибиторов ПЦР).
Секвенирование, биоинформатика и анализ
образцов были количественно определены и объединены в единую эквимолярную библиотеку и секвенированы в Центре инноваций Génome Québec при университете Макгилла в Монреале, Квебек, Канада. Библиотеку секвенировали в одном направлении на половине планшета для пикотитра с использованием платформы Roche GS-FLX (454). Основания вызывались с помощью Pyrobayes [38], а последовательности фильтровались по длине (40-400 п.н.) и качеству (средний Q20 по фрагменту) с помощью Prinseq [39]. Затем последовательности были демультиплексированы на основе их комбинаций тегов MID (только точное совпадение) и разделены по типу ампликона (16S или CO1, только точные совпадения) с помощью jMHC [40].Программа jMOTU [41] использовалась для сборки последовательностей в молекулярные операционные таксономические единицы (MOTU) на различных уровнях различия пар оснований (отсечки). Последовательности были сгруппированы в MOTU с диапазонами отсечения от 1 до 30 пар оснований (и предложены параметры сбора 95% -ного фильтра с низкой идентичностью BLAST и настройки по умолчанию для перекрытия выравнивания последовательностей). При увеличении значений отсечки (количество пар оснований различается между последовательностями) количество MOTU, производимых jMOTU, уменьшается и в конечном итоге достигает асимптоты.Отсечения были выбраны в начале этой асимптоты, чтобы обеспечить высокую степень таксономического разнообразия за счет получения нескольких MOTU, принадлежащих к одному таксону. MOTU в выбранном отрезке времени были экспортированы в файл sql, который был загружен в программное обеспечение для управления реляционными базами данных PostgreSQL (hwww.postgresql.org). Репрезентативные последовательности были выбраны в качестве первой последовательности, появляющейся в выходных данных jMHC, принадлежащих уникальному MOTU. Все MOTU, представляющие CO1, были опрошены с использованием онлайн-инструмента идентификации Barcode of Life Database (BOLD) [42].Все репрезентативные MOTU, которые не были идентифицированы как виды с помощью онлайн-инструмента BOLD, были отнесены к таксономическому уровню, который включал все потенциальные совпадения с запрошенной последовательностью со 100% идентичностью. MEGAN [43] использовался для подтверждения присвоения таксонов на основе жирного шрифта, а также для присвоения таксономии репрезентативным MOTU без совпадения с жирным шрифтом. Файлы BLAST (BLASTn, запрошены 22 марта 2013 г. с параметрами алгоритма по умолчанию) были импортированы в MEGAN (минимальный балл = 75, минимальная поддержка = 2, верхний процент = 10, минимальная сложность = 0), и присвоения таксонов MEGAN были приняты или отклонены на основе на% идентичностей лучших совпадений каждого MOTU.MOTU присваивались лучшему совпадению, если оно было сходным на 96% или выше и являлось возможным компонентом этой системы исследования, в противном случае MOTU были назначены наиболее разрешенному таксономическому узлу, общему для всех значимых совпадений. Аналогичные критерии использовались для отнесения таксонов к 16S MOTU, за исключением того, что мы также включили последовательности, полученные из наших контрольных образцов, при рассмотрении отнесения таксонов.
Мы использовали PRIMER 6 (PRIMER-E Ltd) [44] для многомерного статистического анализа. Мы использовали анализ сходства (ANOSIM) для сравнения рациона цыплят с типом метода (полевое наблюдение или ДНК) в качестве фиксированного фактора.Мы также провели ANOSIM, чтобы проверить разницу между диетой тупиков и возрастом (цыпленок или взрослый) в качестве фиксированного фактора. Данные были преобразованы в двоичные (наличие / отсутствие для образцов фекалий или для доставки припасов для полевых наблюдений). Матрицы сходства были построены на основе подобия Брея-Кертиса, из которого была запущена ANOSIM с 999 перестановками. Мы использовали неметрическое многомерное масштабирование (MDS, 100 перезапусков) с наложенными векторами, представляющими корреляции (коэффициенты корреляции Пирсона,> 0.35 для сравнения цыплят / взрослых, все для диеты по методам (ДНК / поле)), чтобы визуализировать различия между диетами или цыплятами и взрослыми, а также между методами изучения диеты. На всех графиках MDS значения напряжения были ниже 0,2 [45].
Мы использовали частоту, с которой жертва была обнаружена в выборках, частоту встречаемости (FOO), для количественной оценки рациона, потому что доля последовательностей добычи, обнаруженная в выборке, не обязательно количественно коррелирует с пропорциями потребленной добычи [14]. Мы ограничили расчеты FOO выборками, содержащими не менее 50 последовательностей на маркер для каждого из трех типов выборок, полученных в течение общего периода выборки (временные рамки, когда все типы выборок были доступны для сбора, с 13 июня по 29 июля).Когда таксон был идентифицирован как с 16S, так и с CO1, мы использовали все образцы (которые соответствовали вышеуказанным критериям) для оценки FOO, в противном случае FOO рассчитывали на основе количества образцов, амплифицированных соответствующим геном. Таблица S4 описывает размер выборки для конкретного гена и успешность секвенирования, а также данные, которые используются при создании различных рисунков и таблиц.
Результаты
После начальной фильтрации по качеству и длине 104 313 (16S) и 49 218 (CO1) считываний были демультиплексированы с более чем 98% (16S) и 96% (CO1) последовательностей, успешно сопоставленных с образцами содержимого желудка сельди (n = 44). ) или пробы фекалий взрослых тупиков (n = 64) и цыплят (n = 65).Мы собрали 5759 уникальных ампликонов CO1> 80 п.н. в 132 MOTU с порогом 11 п.н. и 16 710 уникальных ампликонов 16S> 75 п.н. были собраны в 273 MOTU с порогом 12 п.н. MOTU были идентифицированы для 78 уникальных таксонов добычи из царства Animalia, а также одной зеленой водоросли, одной бурой водоросли, трех диатомовых водорослей, двух водных плесневых грибов, трех бактерий, простейших и нескольких таксонов-загрязнителей (чайка, человек и т. Д.). Все таксоны, не содержащие загрязнителей, перечислены в Таблице S1. Последовательности, которые не могли быть отнесены к таксономическому царству или не имели совпадений при запросе с помощью BLAST, были опущены (25% и 20% от 16S и CO1 MOTU).
Мы идентифицировали более уникальную жертву с маркерами штрих-кодирования 16S, чем CO1 (51 и 39 таксонов, таблица S1). Только 12 таксонов были идентифицированы обоими маркерами, но часто наблюдались большие расхождения как в охвате, так и в FOO (Таблица 3). У сельди было наибольшее количество считываний секвенирования в пределах двадцати образцов, дающих не менее 50 последовательностей каждого маркера, за ней следует акадский морской окунь ( Sebastes fasciatus, ). Дополнительные 46 образцов содержали по крайней мере один ампликон из каждого локуса.В этих 66 пробах охват криля, креветок, крабов и омаров, насекомых, брюхоногих моллюсков, кольчатых червей и немертин был выше с 16S (рис. 1). И наоборот, CO1 имел более высокий охват рыб, копепод, кладоцер, амфипод, коловраток и книдарий. Все таксоны, обнаруженные в образцах рациона трех наших хищников (независимо от охвата или периода времени), показаны на Рисунке 2. Образцы желудка сельди имели больше всего разнообразный комплекс таксонов. Предполагается, что многие таксоны в рационе сельди являются планктонными стадиями морских беспозвоночных, за исключением полихеты без фазы планктонной личинки [46] (Ragworm, Hediste diversicolor ) и, возможно, улитки из рода Lacuna . который имеет одного известного представителя залива Мэн с прямым развитием [47].Копеподы и декаподы — преобладающие типы добычи; однако сельдь, по-видимому, также является хищником иглокожих, книдарий, двустворчатых моллюсков, брюхоногих моллюсков и по крайней мере восьми видов рыб.