Ветеринарные технологии. Корма отбор проб


Взятие средней пробы кормов | Ветеринарные технологии

Для определения химического анализа корма специалисты в хозяйствах отбирают средние его образцы и отправляют в лабораторию для исследования.При анализе кормов большое значение имеет правильный отбор средней пробы. По химическому составу и свойствам средний образец должен быть по возможности точной копией всей партии корма.ПАРТИЯ КОРМА - это любое количество однородного корма, изготовленное по одной технологии, предназначенное к одновременной приемке или одновременному хранению.ВЫЕМКА, ИЛИ РАЗОВАЯ ПРОБА – небольшое количество корма, отобранное от партии за один прием для составления исходного образца.ИСХОДНЫЙ ОБРАЗЕЦ - совокупность всех выемок от одной партии корма, взятых из разных мест хранилища, скирды и т.д.СРЕДНЯЯ ПРОБА, ИЛИ ОБРАЗЕЦ - небольшое количество корма, отобранное из исходного образца таким образом, чтобы оно по возможности наиболее полно отражало химический состав и свойства всей партии корма.Из средней пробы берут навески корма для определения отдельных его питательных веществ.Взятие средней пробы сена.Согласно ГОСТ среднюю пробу сена, закладываемого на хранение в хозяйствах, отбирают по окончании его заготовки, но не раннее 30 суток после закладки в стога, скирды, сараи, ангары.Разовые пробы из непрессованного сена по 200-250г с каждого места отбирают вручную или пробоотборником от партии массой до 25 тонн - 20 проб, и от каждых последующих 5 тонн - 4 пробы.От партии прессованного сена до 15 тонн отбирают 3% тюков (не менее 5 тюков), массой 15-50 тонн - 1 % тюков (не менее 15 тюков). Разовые пробы отбирают с каждого тюка по одному пласту: из 1-го - поверхностный, из 2-го - последующий и т.д. Исходный образец должен быть не менее 5кг.Из исходного образца, разложенного тонким слоем на ровной поверхности размером 2х2м, отбирают среднюю пробу из 10-ти различных мест по 100г, которая в общем должна составлять не менее 1кг. После чего среднюю пробу осторожно упаковывают в плотную бумагу или полиэтиленовый мешок и с сопроводительной посылают в лабораторию.Взятие средней пробы силоса и сенажаПробы силоса и сенажа берут из башен, ям, траншей через 4 недели после закладки на хранение по окончании процесса консервирования, но не позднее чем за 10 дней до начала скармливания.Из траншей пробы корма отбирают на глубине не менее 2м, при этом для анализа не включают верхний 20см слой. Пробы берут вручную или механическим пробоотборником ПС-1.Вначале отбирают 3 разовые пробы корма: первую - в центре одной из торцевых сторон на расстоянии 5 м от нее; вторую - в траншеях с прямыми стенами на расстоянии 0,5 м, а с наклонными стенами - на расстоянии 1 м от одной из стен в средней части по длине траншеи; третью - в центре траншеи.Из башен пробы отбирают вначале из верхнего 2-х метрового слоя, после его выемки из оставшейся части на глубине не менее 2м. Разовые пробы берут: первую - в центре башни, вторую - на расстоянии 2м, третью на расстоянии 0,5м от стен башни. Масса каждой пробы должна быть около 5кг.Из исходного образца методом квадрата отбирают среднюю пробу массой не менее 2кг. Среднюю пробу помещают в полиэтиленовый пакет или стеклянную тару с плотно притертой крышкой и добавляют 5мл смеси хлороформа с толуолом в соотношении 1:1. Допускается хранение средней пробы в холодильнике в течение 24 часов с момента поступления в лабораторию.Взятие средней пробы корнеплодовХимический состав и качество корнеплодов зависит от величины корней, поэтому в среднюю пробу должны входить крупные, средние и мелкие корни. Вначале берут подряд около 100-150 корней, очищают от земли и сортируют на крупные, средние и мелкие. Затем каждую группу взвешивают и определяют их соотношение в образце. Пример:крупные корни весят 43кг - 42% - 4,2кг;средние корни весят 36кг - 35% - 3,5кг;мелкие корни весят 23кг - 23% - 2,3кгИтого: 102кг - 100% - 10кг.Средняя проба составляет 8-10кг. Ее упаковывают в ящик, во избежание потери влаги обкладывают влажными опилками, и с сопроводительной отправляют в лабораторию.Взятие средней пробы зернаПри хранении зерна на складах поверхность насыпи разделяют на секции площадью около 100м2; выемку делают в пяти точках (в центре и по углам) на расстоянии 1м от границы секции из верхнего (10-15 см), среднего и нижнего слоев. Масса выемок зерна из каждой секции должна составлять 2кг.Из автомашин разовые пробы берут со всей глубины в 5-и точках на расстоянии 0,3м от бортов кузова. Масса выемок должна быть не менее 1кг.Выемки зерна, затаренного в мешки, берут мешочным щупом вверху, середине, внизу. Если в партии 10 мешков, разовые пробы берут из каждого мешка, если более 10-ти, то из 5-10 мешков.При массе выемок больше 2кг исходный образец высыпают на стол, распределяют в виде квадрата и с помощью двух деревянных планок троекратно перемешивают, затем по диагонали делят на четыре треугольника. Из двух противоположных треугольников зерно убирают, а два оставшихся снова перемешивают и делят на треугольники. Так делают до тех пор, пока не останется 350-500г зерна. Среднюю пробу помещают в полиэтиленовый мешок и с сопроводительной отправляют в лабораторию.Взятие средних проб комбикормовПри хранении рассыпного комбикорма на складах, поверхность насыпи делят на квадраты площадью 4-5м2, выемки делают из середины каждого квадрата. При высоте насыпи до 0,75м комбикорм берут из верхнего и нижнего слоев, при высоте более 0,75м - из верхнего, среднего, нижнего.При хранении комбикорма в мешках, разовые пробы берут мешочным щупом из верхней и нижней частей. Выемки берут из 5% всех мешков данной партии, причем мешки должны находиться в различных местах.Общая масса выемок исходного образца рассыпного, гранулированного и брикетированного комбикорма должна составлять не менее 4кг. Среднюю пробу рассыпного и гранулированного комбикорма из образца выделяют как из образца зерна.Для средней пробы брикетированного комбикорма из образца отбирают 6 брикетов. Один или два брикета из шести выделенных раннее используют для определения их плотности, а остальные хранят в течение месяца на случай арбитража.Взятие средней пробы жмыхов и шротовВыемки жмыхов, шротов делают при погрузке и выгрузке из расчета 250г с 1 тонны продукции, но не менее 2,5кг от партии. Если среднюю пробу берут с транспортера, то поток жмыха пересекают ковшом емкостью 0,5кг через равные промежутки времени не менее 10 раз. Если жмыхи (шроты) затарены в мешки, то выемки берут из каждого пятого мешка по 0,5кг. Из первого - сверху, из второго - в середине, из третьего - снизу.При хранении насыпью, ее поверхность делят на секции площадью 1м2. В каждой секции в шахматном порядке берут пробы из верхнего, среднего и нижнего слоев. Общая масса выемок должна составлять 1кг с каждой тонны продукции.Из исходного образца методом квадрата отбирают среднюю пробу массой 350-500г, которую разделяют на две части: одну оставляют, другую отправляют в лабораторию.Взятие средней пробы молокаПеред взятием пробы молоко тщательно перемешивают. Пробу берут металлической трубкой диаметром 9мм, которую погружают вертикально до дна сосуда. Верхнее отверстие трубки закрывают пальцем, трубку вынимают из сосуда и сливают молоко в чистую посуду, плотно закрывая пробкой. Средняя проба для анализа составляет 250-500мл молока. Двухсуточные пробы молока консервируют 40% раствором формалина из расчета 1-2 капли на 100мл молока.Для определения сахара, казеина, альбумина, глобулина, а также плотности используют односуточную пробу незаконсервированного молока.Взятие средней пробы жидких и водянистых остатков технических производств (барда, пивная дробина, мезга, жом, патока кормовая)От партии данных кормов разовые выемки берут черпаком, из 10 точек с различной глубины (после стекания основной массы воды - для пивной дробины, барды). Разовые пробы соединяют в исходный образец массой 10кг и отбирают среднюю пробу, которая должна обеспечить получение около 150г сухого вещества.Такие корма можно консервировать в стеклянной посуде с плотной пробкой смесью хлороформа и толуола; толуола и ксилола в соотношении 1:1; формалином из расчета 15мл на 1кг корма. При определении сахара корм нельзя консервировать формалином. Среднюю пробу кормов отправляется в лабораторию с сопроводительной.СОПРОВОДИТЕЛЬНАЯ1. Название корма _________________________________________2. Масса пробы корма _______________________________________3. Дата взятия образца _____________________________________________4. Время заготовки корма ____________________________________5. Фаза вегетации ___________________________________________6. Условия уборки ___________________________________________7. Способ хранения _________________________________________8. Органолептическая оценка всей партии кормов (цвет, запах, консистенция, наличие примесей и пр.) ________________________________________________________________________________________9. Запас корма ______________________________________________10. Провести анализ корма на содержание ______________________Дата ___________Должности и фамилия(разборчиво)В хозяйстве на все корма оформляют паспорт качества

ПАСПОРТ КАЧЕСТВАХозяйство, район, область ______________________________________Отделение, бригада, звено ______________________________________Вид корма ___________________ Кормовая культура _______________Фаза вегетации растений в период уборки _________________________3 укоса _________________________Год урожая ____________________________________________________Тип хранилища и его номер ________________, емкость ________м3Масса заложенного в хранилище сырья, т______________________Масса добавленной соломы, т ________________________________Масса корма в хранилище, т _________________________________Дата начала загрузки «___»__________, окончания «___» ____________Вид укрытия _____________Дата укрытия _____________Дата отбора проб на анализ «___» _______________ 20__г.Подписи ответственных лиц, за отбор проб:_____________________________________________МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ТЕМЕ «ПРАВИЛА ОТБОРА СРЕДНИХ ПРОБ КОРМОВ» для студентов факультетов биотехнологии и ветеринарной медицины // Троицк: УГАВМ, 2007 - 7 с.

vet174.ru

ГОСТ ISO 6497-2014 Корма. Отбор проб, ГОСТ от 18 мая 2016 года №ISO 6497-2014

ГОСТ ISO 6497-2014

МКС 65.120

Дата введения 2017-07-01

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 декабря 2014 г. N 46-2014)За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны поМК (ISO 3166) 004-97

Код страны поМК (ISO 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 мая 2016 г. N 353-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 6497-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 6497:2002* "Корма для животных. Отбор проб" ("Animal feeding stuffs - Sampling", IDT).________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 10 "Корма для животных" технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).Наименование настоящего стандарта изменено по отношению к наименованию указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (пункт 3.6)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕИнформация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru).

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает методы отбора проб кормов, в том числе рыбного корма, для проведения контроля качества для торговых, технических и правовых целей.Стандарт не распространяется на корма для домашних животных и на методы отбора проб для микробиологических исследований. Условия отбора проб и требования к отбору проб устанавливаются отдельно для кормов, имеющих различную физическую природу.Для определенных категорий кормов конкретные методы отбора проб установлены в стандартах на эти корма. Их список приведен в [1]-[9]. При отборе проб указанных продуктов следует использовать эти методы.Отбор проб для определения веществ, которые могут быть неравномерно распределены, приведены в приложении A.

2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины и определения:

2.1 поставка (consignment): Определенное количество реализуемого корма, отправленное или полученное единовременно.Примечание - Поставка может состоять из одной или более партий (см. 2.2).

2.2 партия (lot): Определенное количество продукции, имеющее одинаковые характеристики.Примечание - Одинаковые характеристики могут быть обусловлены такими факторами, как поставка продукции одним производителем, всегда использующим один и тот же технологический процесс, где производство отличается стабильностью, что подтверждается стремлением индивидуальных характеристик к нормальному распределению или близкому приближению к нормальному распределению. Следовательно, термин "партия" означает "контрольную партию" при отборе проб, т.е. количество материала или серию объектов (совокупность), из которых извлекают и анализируют пробу. Таким образом, данный термин может не означать серию объектов, которую называют партией, имея в виду, например, партию отправленного груза.

2.3 точечная проба (increment): Количество продукта, отобранного единовременно из одной точки партии.

2.4 объединенная проба (bulk sample): Количество продукта, полученного путем объединения и перемешивания всех точечных проб, отобранных из одной и той же партии.Примечание - Совокупность обособленных и идентифицируемых точечных проб, предназначенных для проведения отдельных испытаний, можно назвать термином "суммарная проба".

2.5 сокращенная (средняя) проба (reduced sample): Представительная часть объединенной пробы, полученная в процессе последовательного деления или сокращения таким образом, чтобы масса или объем были приблизительно такими, какие необходимы для лабораторных проб.

2.6 лабораторная проба (laboratory sample): Проба, представительная в плане качества и состояния партии, полученная путем деления сокращенной пробы и предназначенная для анализа или другого исследования.Примечание - Из каждой отобранной пробы получают три или четыре лабораторные пробы. Одна из них предназначена для испытаний, и по меньшей мере одну сохраняют для повторных испытаний. Если требуется более четырех лабораторных проб, количество сокращенной пробы необходимо увеличить для выполнения требования к минимальному количеству для всех лабораторных проб.

3 Общие положения

3.1 Представительный отбор проб

Целью представительного отбора проб является получение малой доли корма из партии таким образом, чтобы определение любой конкретной характеристики этой доли отражало среднее значение характеристики данной партии.Отбор проб из партии проводят путем многократного отбора точечных проб из различных мест партии. Эти точечные пробы объединяют путем перемешивания, при этом образуется объединенная проба, из которой путем деления приготовляют представительные лабораторные пробы.

3.2 Селективный отбор проб

Если в точечной пробе отбираемого корма отмечают значительные различия качества по отношению ко всему объему корма, эти порции следует отделять от корма и работать с ними как с отдельной партией. В таких случаях следует указать данный факт в акте отбора проб.Если не существует возможности разделить корм на отдельные партии, из данного корма проводят отбор проб как из одной партии и в акте отбора проб указывают данный факт. По возможности следует указать долю той продукции, которая имеет отличия.

3.3 Статистические аспекты

Отбор для приемочного контроля является обычным методом отбора проб кормов для животных. Для выборочного контроля по качественным признакам имеется план контроля, основанный на биномиальном распределении, однако для практических целей этот план был упрощен до зависимости на основе квадратного корня между объемом партии и количеством точечных проб.Примечания

1 Для нештучной продукции дисперсия выборки может быть приемлемо однообразной, если для партии до 2,5 т отбирают не менее семи точечных проб, а для партий от 2,5 до 80 т количество отобранных точечных проб равняется по меньшей мере , где - масса партии в тоннах. Если партия превышает 80 т, зависимость на основе квадратного корня также применима, но возрастает риск принятия неправильного решения на основе проб. Вместе с тем данный вопрос может быть разрешен между заинтересованными сторонами.

2 Применение зависимости на основе квадратного корня различно для отбора проб упакованных кормов для животных, для жидкой и полужидкой продукции, для блоков и кусковых материалов и для грубых кормов с учетом изменения объема пробы.

4 Персонал, осуществляющий отбор проб

Отбор проб проводят опытные работники, специально подготовленные для осуществления отбора проб кормов для животных и которые ознакомлены с рисками и опасностями, связанными с данной продукцией и процессом отбора проб.

5 Идентификация и общая проверка партии до отбора проб

Надлежащим образом идентифицируют конкретную партию до отбора проб. Для этих целей при необходимости сличают число единиц продукции в партии, массу партии или ее объем, а также маркировку на емкостях и этикетки с информацией сопровождающих документов.В акте отбора проб отмечают любые особенности, относящиеся к отбору представительных проб, состоянию партии и окружающей среды.Отделяют поврежденные порции партии и/или, если партия чрезмерно неоднородная, делят ее на порции, обладающие более близкими свойствами. Обрабатывают каждую из этих порций как отдельную партию.

6 Оборудование для отбора проб

6.1 Общие положения

Выбирают оборудование для отбора проб, соответствующее размеру частиц продукции, объему отбираемой пробы, размеру емкости, физическому состоянию продукции и т.д.

6.2 Оборудование для отбора точечных проб из твердой продукции

6.2.1 Оборудование для отбора проб вручную

6.2.1.1 Отбор проб насыпной продукцииОборудованием является обычная лопата, ручной совок, цилиндрический пробоотборник (например, отборочный щуп, трубчатый зонд или рукавный зонд) и конический пробоотборник. Отборочный щуп может иметь одну или несколько ячеек.Отбор продукции, находящейся в движении на относительно низкой скорости, можно осуществлять вручную.

6.2.1.2 Отбор проб из мешков или других видов упаковкиОборудованием является ручной совок, отборочный щуп или зонд для мешков, цилиндрический пробоотборник, конический пробоотборник и желобчатый делитель.

6.2.2 Оборудование для механического отбора пробМожно использовать оборудование, аттестованное для периодического отбора точечных проб из потока продукции (например, пневматическое оборудование).Отбор продукции, находящейся в движении на относительно низкой скорости, можно осуществлять механизмами без ручного управления.

6.3 Оборудование для взятия точечных проб из жидкой или полужидкой продукции вручную или с использованием механизмов

Оборудованием является поршень для перемешивания, мешалка, отборочная бутыль, отборочная пробирка, зональный пробоотборник, дозатор, имеющие соответствующие размеры.

6.4 Соблюдение правил чистоты

В процессе отбора, сокращения, хранения и обращения с пробами следует принимать особые меры с целью сохранения свойств пробы и контролируемой партии. Оборудование для отбора должно быть чистым, сухим и без посторонних запахов. Материал, из которого изготовлено оборудование, не должен оказывать влияние на качество пробы. Оборудование подлежит тщательной очистке между отборами проб. Это особенно важно в тех случаях, когда речь идет об отборе кормов с высоким содержанием масел. Персонал, осуществляющий отбор проб, должен надевать одноразовые перчатки и утилизировать их в период между работой с пробами таким образом, чтобы не допустить загрязнения последующей пробы.

7 Емкости для проб

7.1 Общие требования

Емкости для проб должны гарантировать сохранность характеристик пробы до момента испытаний. Они должны иметь размер, незначительно превышающий размер помещаемой пробы, и должны быть опломбированы способом, позволяющим визуально определить вскрытие или повторное опломбирование.

7.2 Соблюдение правил чистоты

Емкости для проб должны быть чистыми, сухими и без посторонних запахов. Материал, из которого изготовлены емкости для проб, не должен оказывать влияние на качество пробы.

7.3 Емкости для проб твердой продукции

Емкости для проб твердой продукции и крышки для них изготовляют из водонепроницаемого и жиронепроницаемого материала (например, стекла, нержавеющей стали, жести или подходящих видов пластмассы), они должны быть с широким отверстием, предпочтительно цилиндрической формы, и иметь объем, соответствующий размеру помещаемой пробы. Допускается также использование подходящих пластиковых мешков. Емкости должны обеспечивать надежную герметичность. Если пробы предназначены для определения фоточувствительных веществ, таких как витамины A, D, фолиевая кислота, B и C, а также умеренно чувствительных веществ, таких как витамины K, B и B, емкости должны быть светонепроницаемыми.

7.4 Емкости для проб жидкой и полужидкой продукции

Такие емкости должны быть изготовлены из надлежащего материала (предпочтительно из стекла или пластмассы), надлежащего объема, обладать герметичностью и быть предпочтительно темного цвета. Необходимо учесть требования 7.3, касающиеся проб, используемых для определения фоточувствительных веществ.

8 Методика работы

8.1 Место отбора проб

По возможности отбор проб проводят в местах, защищенных от случайного загрязнения, такого как влажный воздух, пыль и копоть. По возможности пробы следует отбирать при погрузке или разгрузке. Если отбор проб не может быть осуществлен в то время, когда корм находится в движении, контролируемая партия должна быть размещена таким образом, чтобы был доступ к каждой из ее частей, с тем чтобы получить представительную лабораторную пробу.

8.2 Классификация кормов для целей отбора проб

Для целей отбора проб корма классифицируют следующим образом:

a) твердые корма - зерно, семена, зернобобовые и гранулы;

b) твердые корма - мука и порошок;

c) грубые корма;

d) корма кусковые и блочные;

e) жидкие или полужидкие корма.

8.3 Объем проб

Необходимо отобрать достаточное количество точечных проб, чтобы получить пробу, представительную для партии, из которой производится отбор проб. Количество точечных проб и их объем определяют в соответствии с планом отбора проб на основе объема партии и целесообразности отбора проб. Объем каждой конкретной партии зависит от ряда факторов (см. 2.2). Настоящий стандарт разработан для объемов партий, не превышающих 500 т.Примечание - Описываемая методика отбора проб в равной степени применима к большим количествам, чем установленный максимальный объем партии при условии, что не принимают в расчет максимальное количество точечных проб, приведенное в различных таблицах. Пропорционально увеличивается количество точечных проб, определяемое по формуле с квадратным корнем, приведенных в соответствующей части методики, а также минимальный объем объединенной пробы. Такой подход не препятствует делению крупной поставки на более мелкие партии и каждой контролируемой партии в соответствии с настоящим стандартом.Объем объединенной пробы определяют на основе объема точечных проб, отбираемых в соответствии с конкретным планом отбора проб, при этом также устанавливают минимальные размеры в зависимости от объема партии. Объем каждой лабораторной пробы должен в три раза превышать массу или объем необходимой анализируемой пробы. Объем каждой лабораторной пробы должен быть достаточным для проведения испытаний.

8.4 Отбор проб зерна, семян, зернобобовых и гранул

8.4.1 Примеры продукции:зерновые: кукуруза, пшеница, ячмень, овес, рис, сорго и т.д.;масличные культуры: семена подсолнечника, земляные орехи, семена рапса, соевые бобы, семена хлопчатника, семена льна и т.д.;зернобобовые: бобы и т.д.;гранулы: корма, изготовляемые в форме гранул.

8.4.2 Объем партийДля продукции, поставляемой в упаковке, партия включает число фактических упаковок или число, которое составляет максимальный объем партии.Для нештучной продукции, поставляемой в емкостях, партия состоит из числа фактических емкостей или минимального числа емкостей, которые содержат максимальный объем партии. В тех случаях, когда одна емкость сама по себе превышает максимальный объем партии, содержимое этой емкости составляет партию.

8.4.3 Количество отбираемых точечных пробДля нештучной продукции или нештучной продукции, в том числе поставляемой в емкостях, минимальное количество точечных проб, отбираемых случайно, указано в таблице 1.Таблица 1

Масса m партии, т

Минимальное количество точечных проб

До 2,5

7

Более 2,5

, не более 100

Когда продукцию поставляют в упаковке, минимальное количество случайно отбираемых упаковок, из которых отбирают точечные пробы, равно:

а) для упаковок массой не более 1 кг минимальное количество точечных проб, отбираемых случайно, указано в таблице 2;Таблица 2

Количество n упаковок в партии

Минимальное количество контролируемых упаковок

1-6

Каждая упаковка

7-24

6

docs.cntd.ru

ГОСТ Р ИСО 6497-2011 Корма для животных. Отбор проб

Корма для животных. Отбор проб

ГОСТ Р ИСО 6497-2011

8.4.5    Методика

8.4.5.1    Общие положения

Отбор проб осуществляют в соответствии с указаниями 9.1. Отбор проб поштучной продукции, поставляемой о емкостях, по возможности проводят в период разгрузки или погрузки. Аналогичным образом, когда продукцию необходимо непосредственно перевезти на элеватор или на склад, отбор проб по возможности проводят в период транспортирования.

8.4.5.2    Отбор проб нештучной продукции

При отборе проб нештучной продукции, например из штабеля или насыпи, определяют количество отбираемых точечных проб, принимая во внимание минимальное количество точечных проб, установленное в 8.4.3. Выбирают место, из которого необходимо отобрать каждую точечную пробу случайным образом, принимая во внимание поверхностную зону и глубину, с тем чтобы все части партии имели равные шансы быть выбранными.

При отборе проб продукции, находящейся в движении, точечные пробы отбирают из области всего поперечного сечения потока, вручную или механически, через интервалы времени в зависимости от скорости потока, как это изложено ниже. Для определения времени прохождения точки отбора проб в партии следует использовать скорость потока и объем партии. Это время делят на количество отбираемых точечных проб, получая при этом временные диапазоны. Случайным образом отбирают точечную пробу в точение каждого из этих временных диапазонов.

8.4.5.3    Отбор проб из упаковок

Случайным образом отбирают из партии количество упаковок, из которых отбирают точечные пробы, принимая в расчет минимальное количество точечных проб, установленное в 8.4.3. Открывают упаковки и отбирают точечные пробы с использованием оборудования, описанного в 6.2.1.2.

Если точечные пробы отбирают из закрытых упаковок, можно использовать отборочный зонд или щуп для мешков. Щупы можно использовать горизонтально или вертикально, но они должны вводиться в упаковку по диагонали. Точечные пробы, отбираемые из упаковок, можно отбирать по всей глубине или с трех уровней: верхнего, среднего и нижнего.

После отбора точечных проб из упаковки следует закрыть отверстие.

Если нет возможности или не совсем удобно использовать вышеуказанный метод (или он не рекомендуется из-за неоднородности негранулироваиных смесей), содержимое упаковки переносят на чистую сухую поверхность, тщательно перемешивают и отбирают одну лопату в качестве точечной пробы.

8.4.6    Приготовление лабораторной пробы

Все пробы отбирают и приготавливают в кратчайшие сроки во избежание изменений качества проб и с целью предотвращения их загрязнения. Точечные пробы объединяют и тщательно перемешивают с целью образования объединенной пробы. Объединенную пробу помещают в емкость или мешок, которые не оказывают вредного воздействия на качество пробы.

Объединенную пробу сокращают вручную (например, с использованием метода «случайных чашею» или путем деления на четыре равные доли) или механическим способом (например, с использованием конического делителя, центрифужного делителя или многощелевого делителя). Этот процесс повторяют, каждый раз перемешивая, чтобы получить сокращенную пробу надлежащего объема, но не менее 2 кг.

Сокращенную пробу тщательно перемешивают и. в соответствии с требованиями, делят на три или четыре лабораторные пробы приблизительно равного объема (не менее 0,5 кг). Каждую лабораторную пробу помещают в соответствующую емкость. См. также примечание к 2.6.

8.5 Отбор проб муки и порошкообразной продукции

8.5.1 Примеры продукции

Данная продукция является продуктом переработки (например, измельченная или смолотая, и возможно также сушеная) перечисленных нижо кормов, с размером частиц значительно меньшим, чем непереработанная продукция, как индивидуально, так и в смесях:

а) мука и порошкообразная продукция растительного происхождения, изготовленная из:

1)    целых зерен или некоторой части зерна,

2)    непереработанных. переработанных или экстрагированных масличных культур,

3)    непереработанных. переработанных или экстрагированных зернобобовых.

4)    сушеной люцерны или травы,

5)    растительных белковых концентратов.

6)    крахмала.

7)    дрожжей;

6

standartgost.ru

Отбор проб кормов

Число упаковочных единиц

От какого числа упаковочных единиц отбирают

пробы

До 10

От 11 до 100

От 101 и больше

От каждой упаковочной единицы

От 10 упаковочных единиц

От 10 упаковочных единиц и дополнительно по 3 от

каждых 100 упаковочных единиц

Первичные пробы грубых кормов (сено, солома) берут из разных мест скирды (стога) при помощи ножниц и пинцета из расчета одна проба массой не менее 40 г на 4 м2 площади скирды.

Собранную зеленую массу берут, как и грубые корма, увеличив массу первичной пробы до 100 г.

Корнеплоды (клубнеплоды) в зависимости от величины отбирают из расчета одна-три штуки на 4 м2 площади бурта, отсека. С отобранных корнеплодов скальпелем в местах, где имеются остатки земли, срезают поверхностный слой, который используют для исследования.

Пробы силоса, хранящегося в ямах (траншеях), отбирают, как и робы почвы (п. 5.2.4.), вынутого из траншеи - как пробы зеленой массы.

В лабораторию направляют среднюю пробу, которую составляют из хорошо перемешанных первичных проб данной партии, емкости и т.п. Масса средней пробы должна быть не более 500 г.

5.2.4. Отбор проб почвы. Обследованию подлежат участки, подозреваемые в обсеменении возбудителем сибирской язвы. Обследуемую площадь разбивают на квадратные участки (сторона каждого не более 4 м). Почвенным буром отбирают пробы почвы массой 20-30 г по углам и в центре каждого участка.

Пробы почвы с территории, подозреваемой в поверхностном обсеменении возбудителем сибирской язвы, берут на глубину до 15 см.

Перед взятием проб на территории скотомогильников верхний слой почвы на месте взятия пробы снимают на 2-3 см и пробу берут на глубину до 2 м через каждые 25 см.

Вынутую из глубины и не использованную для проб почву с целью обеззараживания смешивают с сухой хлорной известью, содержащей 25% активного хлора, в соотношении одна часть хлорной извести на три части почвы, слегка увлажняют и сбрасывают в шурф. Место отбора проб дезинфицируют раствором хлорной извести, содержащей 5% активного хлора, инструменты - огнем паяльной лампы.

5.2.5. Отбор проб воды из естественных и искуственных водоемов берут с поверхности (на глубине 10-15 см) и дна при помощи батометра или специально приспособленной бутыли. Объем каждой пробы не менее 0,5 л, общий объем не менее 1 л.

Кроме того, берут пробы придонного осадка у береговой кромки, которые исследуют как пробы почвы.

5.2.6. Смывы с объектов внешней Среды. Их делают с площади 100 см2 марлевым тампоном, смоченным стерильной водой, Тампоны помещают в пробирки с 4-5 см3 стерильной воды или 0,9%-ного раствора натрия хлорида, которые закрывают резиновой пробкой.

5.2.7. Каждую отобранную пробу помещают в сухую стерильную банку и закрывают стерильной крышкой, пробкой или пергаментом; можно использовать полиэтиленовые мешочки, которые завязывают шпагатом. Пробы воды наливают в стерильные стеклянные бутылки и закрывают стерильными резиновыми пробками. Пробы нумеруют (на пробы шерсти ставят номер кипы), упаковывают во влагонепроницаемую тару и направляют в лабораторию с нарочным.

В сопроводительной к пробам указывают причину проведения исследования, какой материал и в каком количестве направляют, место и дату отбора материала, для проб шерсти и кормов дополнительно указывают их происхождение, объем (массу) партии, вид упаковки и число упаковочных единиц. При направлении в лабораторию нескольких проб и сопроводительной прилагают опись, где указывают номера и место отбора каждой пробы.

5.2.8. Отбор и упаковку проб проводят с соблюдением мер личной профилактики, не допуская рассеивания возбудителя при отборе и транспортировке проб и контаминации самих проб.

5.3. Подготовка проб к исследованию и дальнейшей обработке используют только стерильные растворы, посуду, фильтраты, инструменты.

5.3.2. От каждой пробы шерсти отбирают наиболее загрязненные части, измельчают ножницами, вместе с пылью помещают в колбу и заливают 10-кратным (по массе) количеством 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 10-15 мин и дают отстояться. Смыв фильтруют через два-три слоя марли для удаления грубых частиц.

5.3.3. Из разных мест присланной пробы шкуры берут кусочки массой 1 г, помещают в фарфоровую ступку и заливают 0,9%-ным раствором натрия хлорида с таким расчетом, чтобы получить 10-15 мл суспензии. Спустя некоторое время (после достаточного размягчения материала) кусочки измельчают ножницами и оставляют при температуре 2020 С еще на 2-3 ч. После этого пробы хорошо растирают в той же жидкости до получения волокнистой мезги, которую удаляют, предварительно отжав ее пестиком на внутренней боковой поверхности ступки.

5.3.4. Пробу корма в количестве 50-100 г (грубые корма после измельчения ножницами) помещают в колбу необходимой вместимости и заливают 0,9%-ным раствором натрия хлорида из расчета получения 15-20 мл смыва. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 10-15 мин, дают отстояться 5-8 мин, не допуская набухания кормов, и фильтруют через два-три слоя марли.

5.3.5. Пробы почвы освобождают от корней, камешков и тщательно перемешивают. От каждой пробы берут 50-70 г, помещают в колбу, заливают 0,9%-ным раствором натрия хлорида, дистиллированной водой или 0,5%-ным раствором пирофосфата натрия из расчета получения 15-20 мл смыва, хорошо встряхивают в течение 25 мин, дают отстояться 5-8 мин и фильтруют через три слоя марли.

5.3.6. Воду с илистыми частицами фильтруют через два-три слоя марли, чистую воду исследуют без предварительной подготовки.

5.3.7. Тампоны, используемые для взятия смывов с объектов внешней Среды, отжимают о стенки пробирки и удаляют, а оставшуюся жидкость подвергают исследованию.

6. Методы обогащения проб и бактериологическое исследование.

6.1. Каждый взятый смыв с шерсти, кормов, почвы, объектов внешней Среды делят на две части.

6.2. Одну часть прогревают на водяной бани 80 мин при 650 С и фильтруют через одну-две фиьтровальные мембраны № 3 в фильтре Зейтца при небольшом вакууме. Осадок с каждого фильтра смывают несколькими (6-8) каплями 0,9%-ного раствора натрия хлорида и используют для посева.

Фильтровальные мембраны перед использованием стерилизуют кипячением в дистиллированной воде (со сменой ее) два раза по 10 мин, фильтр Зейтца - обычным способом, Мембраны закладывают в фильтр Зейтца в стерильных условиях.

6.3. Вторую часть смыва или пробы без предварительного прогревания фильтруют через фильтровальные мембраны и исследуют аналогично (п. 2.4.2). Кроме того, смывом с мембраны заражают двух белых мышей подкожно в дозе 0,2-0,3 мл и наблюдают за ними десять суток. Из органов павших мышей делают мазки, которые окрашивают по Граму и на капсулу, и посевы на МПА и в МПБ.

6.4. Смывы с мучнистых кормов, которые трудно фильтруются через фильтровальные мембраны. центрифугируют 15 мин при 3000 об\мин. Высевы делают из верхнего слоя надосадочной жидкости и осадка.

6.5. При отсутствии фильтровальных мембран прогретые и непрогретые смывы, а также пробы воды центрифугируют 15 мин при 3000 об\мин, надосадочную жидкость удаляют, а из осадка делают посевы.

6.6. Суспензией из шкурок (п. 2.3.3.) заражают двух белых мышей, как указано в п. 2.4.3.

Остаток суспензии центрифугируют 15 мин при 3000 об\мин, затем 2\3 надосадочной жидкости удаляют, оставшуюся жидкость с осадком прогревают на водяной бане 30 мин при 650 С. После охлаждения осадок используют для посева.

6.7. Материал, подготовленный для исследования, высевают на три-четыре чашки с МПА или агаром Хоттингера и на дифференциально-диагностическую среду с 0,01% фенолфталеинфосфатом натрия (при наличии ее). Чашки с посевами инкубируют при 3710 С в течение 18-24 ч.

6.8. Для идентификации с МПА отбирают не менее десяти шероховатых колоний (при отсутствии такого количества - все шероховатые колонии), а с дифференциально-диагностической Среды - все колонии, не изменившие цвета после обработки парами аммиака.

6.9. Из отработанных колоний делают пересев на МПА и в МПБ для дальнейшей идентификации (вместо МПБ пересев можно делать в систему для постановки реакции диск-преципитации).

7. Постановка и учет реакции диск-преципитации.

7.1. Посевы делают в жидкую питательную среду системы, не касаясь геля, из каждой колонии в отдельности или высевают суспензию, приготовленную из нескольких (5-10 колоний). Посевы выдерживают в термостате при 3710 С в течение 16-20 ч.

7.2. Учет результатов проводят визуально. При отрицательном результате дополнительно инкубируют в течение 3-4 ч и повторно исследуют.

7.3. Пробирки вынимают из термостата и оставляют на 10-15 мин при температуре 2020 С, после чего просматривают в проходящем свете на черном фоне.

7.4. Возбудитель сибирской язвы образует в средней части столбика агарового геля тонкую с четкими границами белую линию (диск) преципитации, которая сохраняется в течение четырех дней.

7.5. Почвенные сапрофитные бациллы, за исключением некоторых штаммов Bac. cereus, дают отрицательный результат (диск преципитации отсутствует). Отдельные штаммы Bac. cereus через 16-20 ч образуют в нижней части агарового столбика на границе с преципитирующей сывороткой рыхлую зону преципитации, которая не имеет четких границ и значительно толще, чем диск преципитации, образуемый возбудителем сибирской язвы. Через 36-40 ч зона преципитации, образуемая Bac. cereus, разрыхляется и сливается с преципитирующей сывороткой.

7.6. В качестве контроля при постановке реакции могут быть использованы посевы противосибиреязвенной вакцины СТИ.

7.7. Культуры, давшие положительные результаты по реакции диск-преципитации или нечеткие результаты (рыхлое кольцо), идентифицируют, как указано в п. 2.6.

Культуры, давшие отрицательный результат, дальнейшему исследованию не подлежат.

8. Идентификация культур.

Полученные чистые культуры идентифицируют по следующим тестам: наличие капсулы, морфология микроба, характер роста в МПБ и на МПА, чувствительность к пенициллину (тест “жемчужного ожерелья”).

Методы постановки и учета этих тестов даны в пункте 1.3.5.

8.1. Метод выявления капсулообразования in vitro. Испытуемую культуру высевают в среду ГКИ (приложение, п.5).

Пробирки с посевами закрывают стерильными резиновыми пробками и помещают в термостат при 3710 С. Через 30-120 мин инкубирования у отдельных сибиреязвенных клеток начинается капсулообразование, а спустя 16-18 ч все или большинство сибиреязвенных клеток образуют капсулу. Для выявления капсулообразования из посевов делают мазки.

Мазки фиксируют (приложение, п. 1), окрашивают на капсулу и микроскопируют. При положительном тесте в мазках обнаруживают синие палочки и цепочки, окруженные розовой капсулой.

8.2. Методы выявления капсулообразования in vitro (ускоренная биологическая проба). Испытуемую культуру в дозе 0,1-0,2 мл вводят внутрибрюшинно четырем белым мышам. Через 1-2 ч после заражения убивают по одной мыши, вскрывают, из перитонального экссудата и органов делают мазки-отпечатки для исследования на наличие капсульных палочек возбудителя сибирской язвы. Двух белых мышей оставляют под наблюдением до естественной гибели или на десять дней, как при классической биологической пробе.

9. Учет результатов идентификации культур.

Культуру относят к Bac. anthracis в случае выделения культуры с характерными свойствами и гибели хотя бы одного из двух зараженных суспензией из исходного патологического материала лабораторных животных и выделения из его органов бескапсульных культур, имеющих характерные свойства и чувствительных к сибиреязвенному фагу и пенициллину; выделения культуры с характерными свойствами, не вирулентной для белых мышей, но чувствительной к сибиреязвенному фагу и пенициллину.

10. Определение вирулентности сибиреязвенных культур.

10.1. Для заражения готовят споровую культуру исследуемого штамма. Для этого суточную бульонную культуру засевают на одну из следующих сред: МПА, агар Хоттингера, голодный пшеничный или гороховый агар. Посевы выдерживают три-четыре дня в термостате при 3710 С. Процесс спорообразования контролируют путем подсчета спор при микроскопии раздавленной капли или окрашенных мазков.

10.2. После образования спор у 90-100% микробов бактериальную массу смывают физиологическим раствором и определяют концентрацию спор по стандарту мутности или путем посева серийных разведений на МПА. Из суспензии спор известной концентрации готовят три рабочих разведения с содержаним 10 тыс., 100 тыс. и 1 млн спор в 1 мл.

10.3. Для определения вирулентности культур двум кроликам массой 2-2,5 кг вводят подкожно в области живота по 1 мл разведения с концентрацией 1 млн спор в 1 мл.

10.4. Для определения степени вирулентности по 1 мл раствора каждого разведения (п. 2.8.2.) вводят подкожно в области живота двум кроликам и наблюдают за ними в течение 10 суток.

Степень вирулентности Bac. anthracis определяют по дозе, вызвавшей гибель кроликов. Высоковирулентные штаммы вызывают гибель кроликов при введении 10 тыс. спор, умеренно вирулентные - при введении 100 тыс. и 1 млн спор, слабовирулентные и авирулентные штаммы в указанных дозах не вызывают гибель кроликов.

11. Требования к режиму работы и передаче выделенных культур.

При проведении исследований на сибирскую язву необходимо строго соблюдать правила действующей “Инструкции о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным и подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II группы”.

Выделенные культуры Bac. anthracis медицинские учреждения направляют в специализированные лаборатории Научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока или Научно-исследовательского противочумного института Кавказа и Закавказья Минздрава СССР, ветеринарные - во Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии или Научно-исследовательский ветеринарный институт (г. Казань).

Данным учреждениям предоставлено право давать окончательное заключение о принадлежности атипичных штаммов к виду Bac. anthracis, при этом характер и объем противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий до получения заключения специализированных лабораторий должны решаться на месте, исходя из конкретной сложившейся ситуации.

Приложение

1. Способ фиксации мазков в этиловом

спирте с добавлением 3% перекиси водорода.

При данном способе фиксации мазков споровые и вегетативные формы Bac. anthracis обезвреживаются через 30 мин, при этом не нарушается морфология микроба и специфичность свечения при окраске люминесцирующими сыворотками.

1.1. Для приготовления фиксирующей жидкости во флакон наливают 180 мл этилового 960-ного спирта и 20 мл 30%-ного пергидроля. Содержание перекиси водорода в пергидроле при необходимости определяют по методике, изложенной в Государственной фармакопее СССР.

Фиксирующую жидкость можно использовать в течение 1 мес, при этом флакон необходимо закрывать притертой пробкой и хранить в темном месте.

1.2. Мазки готовят на чистых обеззараженных стеклах общепринятыми методами, высушивают на воздухе, затем опускают в посуду с фиксирующей жидкостью. Через 30 мин мазки извлекают и высушивают на воздухе. Выдерживать мазки более 30 мин в фиксирующей жидкости нежелательно. Дальнейшие манипуляции с мазками проводят как с обезвреженным материалом.

2. Дифференциально-диагностическая среда

для выделения Bac. anthracis.

2.1. Для дифференциации колоний сибиреязвенного микроба от колоний спорообразующих сапрофитов используют тест обнаружения щелочной фосфатазы.

Первичные посевы или посевы подозрительных культур на дифференциально-диагностической среде инкубируют в термостате при 3710 С в течение 18-24 ч.

При наличии роста микроорганизмов в крышку чашки Петри вносят 1-2 мл 25%-ного водного раствора аммиака. Чашку (крышкой вниз) выдерживают при 2020 С в течение 1 мин, после чего визуально или под малым увеличением микроскопа проводят учет теста.

Под действием паров аммиака происходит порозовение колоний микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью, а Bac. anthracis фосфатазной активностью не обладает и его колонии остаются бесцветными.

2.2. Приготовление растворов. Полимиксина М сульфат во флаконе растворяют в стерильной дистиллированной воде, а затем последовательными разведениями стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида доводят до концентрации 10 000 ЕД\мл.

Невиграмон переносят в стеклянный флакон или пробирку и растворяют в 25%-ном водном растворе аммиака при тщательном перемешивании стеклянной палочкой. Затем последовательно разводят стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида до концентрации 100 мкг\мл.

Моющее средство “Прогресс” разводят стерильной дистиллированной водой до 0,1 %-ной концентрации. Гризеофульвин в таблетках тщательно растирают в ступке, затем растворяют в стерильной дистиллированной воде до содержания 100 мкг препарата в 1 мл.

Фенолфталеинфосфат натрия (коммерческий 10%-ный раствор) для стерилизации прогревают на водяной бане при 560 С в течение 30 мин.

2.3. Приготовление дифференциально-диагностической среды. Питательный агар в колбах вместимостью 100 мл расплавляют в кипящей водяной бане и охлаждают до температуры 45-500 С. Затем в агар добавляют основные растворы: полимиксина М сульфата - 0,5 мл; гризеофульвина - 1 мл; моющего средства “Прогресс” - 1 мл; фенолфталеинфосфата натрия - 0,1 мл.

После перемешивания среду разливают в чашки Петри и подсушивают в течение 1,5-2 ч, оставив крышки чашек открытыми. Дифференциально-диагностическую среду после разлива можно хранить в холодильнике в течение одних-двух суток.

2.4. Готовую дифференциально-диагностическую среду выпускает Ставропольский научно-исследовательский институт вакцинации и сывороток (355 100, г. Ставрополь, ул. Биологическая, 20).

3. Приготовление системы для постановки

реакции диск-преципитации.

3.1. Для постановки реакции диск-преципитации необходимо иметь преципитирующую сибиреязвенную сыворотку, очищенный 1%-ный агаровый гель или 1%-ный агар Дифко, жидкую питательную среду, пригодную для культивирования возбудителя сибирской язвы.

3.2. Приготовление системы для постановки реакции диск-преципитации. Преципитирующую сибиреязвенную сыворотку разливают по 0,5-1 мл в стерильные бактериологические пробирки. На поверхность сыворотки, по стенке пробирки, наслаивают пастеровской пипеткой расплавленный и охлажденный до 45-500 С 1%-ный агаровый гель столбиком высотой 5-7 мл. Пробирки необходимо держать в вертикальном положении до застывания агара.

На поверхность застывшего агара вносят 1-1,5 мл жидкой питательной среды. При идентификации культур, выделенных из объектов внешней среды и сырья животного происхождения, в качестве жидкой питательной среды вместо МПБ можно использовать среду ГКИ или бульон Хоттингера с 40%-ной инактивированной сывороткой крови, в этом случае одновременно проводят исследование на капсулообразование.

Систему готовят и применяют в день постановки реакции.

3.3. Приготовление очищенного 1%-ного агарового геля. Сначала готовят нейтральную дистиллированную воду (рН 7,0). Для этого определяют рН имеющейся дистиллированной воды и в зависимости от полученных результатов ее нейтрализуют 1%-ным раствором соляной кислоты (при щелочной реакции).

Необходимое для нейтрализации количество раствора определяют следующим способом. К 100 мл воды небольшими порциями (миллилитрами или каплями) добавляют один из указанных растворов, постоянно определяя рН; по достижении нейтральной реакции (рН 7,0) точно рассчитывают количество раствора, необходимое для нейтрализации всего объема дистиллированной воды.

5 г агар-агара заливают 300 мл нейтральной дистиллированной воды и нагревают в кипящей водяной бане до полного расплавления агар-агара.

Одновременно готовят водный раствор белка куриного яйца.

Берут яйцо массой не менее 56 г и отделяют белок, который тщательно взбивают до образования пенистой массы и растворяют в 200 мл нейтральной дистиллированной воды. Приготовленный раствор белка делят на две части по 100 мл.

В расплавленный агар вносят 0,5 г хлористого кальция (СаСl26Н2О), перемешивают и охлаждают до 45-500 С. К смеси добавляют 100 мл водного раствора белка куриного яйца, ставят в кипящую водяную баню и нагревают (примерно 15-20 мин) до появления хлопьев (реакция коагуляции).

Если белок не свертывается или коагуляция проходит плохо, вносят еще 0,25-0,5 г хлористого кальция и продолжают нагревать до появления хлопьев.

Горячий агар фильтруют через предварительно смоченный в горячей воде отжатый ватный фильтр.

К профильтрованному агару добавляют вторую часть (100 мл) водного раствора яичного белка, перемешивают и снова нагревают в кипящей водяной бане до появления хлопьев. В случае плохого свертывания белка вносят 0,25-0,5 г хлористого кальция и продолжают нагревать до получения коагуляции белка.

После свертывания белка агар вновь фильтруют в горячем виде. Очищенный 1%-ный агаровый гель должен быть прозрачным. Затем его разливают в пробирки или колбы и автоклавируют при 0,5 атм в течение 20 мин. Если после стерилизации выпадает осадок, агаровый гель фильтруют и стерилизуют повторно.

Готовую среду хранят в холодильнике (2-40 С) и используют в течение 6 мес. Для предотвращения высыхания пробирки с агаровым гелем заворачивают в полиэтиленовый пакет.

4. Постановка теста “жемчужного ожерелья”.

Перед постановкой теста готовят стерильный МПА и разливают в три пробирки вместимостью 10 мл (или три колбы вместимостью 100 мл).

В две пробирки (колбы) с охлажденным до 45-500 С агаром стерильно вносят пенициллин из расчета 0,5 и 0,05 ЕД на 1 мл среды. Третья пробирка контрольная.

5. Приготовление среды ГКИ.

Для приготовления среды к раствору Хенкеса с бикарбонатом натрия или бульону Хоттингера добавляют 40% стерильной бычьей сыворотки крови, инактивированной при 560 С в течение 70 мин.

После смешивания компонентов рН среды доводят до 7,2-7,4 5%-ным раствором бикарбоната натрия.

Дополнительными методами диагностики при сибирской язве являются люминесцентный, у людей - аллергический и другие, которые имеют вспомогательное значение.

У крупного рогатого скота сибирскую язву нужно дифференцировать от эмфизематозного карбункула, злокачественного отека, пастереллеза. Эти болезни по клиническим признакам сходны с таковыми при сибирской язве и сопровождаются появлением опухолей отечного характера. Однако при эмфизематозном карбункуле отек безболезненный, холодный на ощупь, крепитирует.

При злокачественном отеке опухоль также из-за пропитанности газами крепитирует, кроме того, она появляется вокруг раны или на половых органах после тяжелых родов. Селезенка чаще нормальных размеров, иногда незначительно увеличена, кровь свернута.

Пастереллез дифференцируют по результатам вскрытия. Селезенка без резкого увеличения и размягчения, кровь свернувшаяся, недегтеобразная.

Микроскопией мазков из патматериала при пастереллезе устанавливают биполяры, при сибирской язве капсульные цепочки палочек.

При тимпании незаразного характера температура тела нормальная, отсутствуют отечные опухоли.

У овец сибирскую язву нужно дифференцировать от брадзота, энтеротоксемии, пастереллеза, эмфизематозного карбункула, злокачественного отека, лейкоза, пироплазмоза. отравлений. тимпании, солнечного удара.

При брадзоте в печени обнаруживают очаги некроза, в почках также ареактивные некротические очаги.

Для инфекционной энтеротоксемии характерна размягченная почка (отсюда соответствующее название болезни “размягченная почка”).

При пастереллезе заболевают чаще ягнята с преимущественным поражением легких.

Для эмфизематозного карбункула характерно наличие в мышцах и подкожной соединительной ткани крепитирующих припухлостей, при разрезе которых выделяются пузырьки газа.

Злокачественный отек развивается в результате травматического поражения кожи и глубоколежащих тканей во время стрижки, кастрации, после ягнения. В отличии от сибирской язвы кровь свернувшаяся, участки отека крепитируют, особенно выражена подкожная эмфизема.

При пироплазмозе отличается сезонность, для возникновения необходимы переносчики - клещи, в крови обнаруживают эритроциты с паразитами-пироплазмами.

Лейкоз отличается резким увеличением селезенки и лимфатических узлов за счет гиперплазии лимфоидной ткани и пролиферации клеток лимфоидного ряда, тогда как при сибирской язве увеличение этих органов связано с резким кровенаполнением тканей и скоплением серозно-геморрагического экссудата (септическая селезенка, серозно-геморрагический лимфаденит).

У свиней сибирскую язву нужно дифференцировать от пастереллеза, злокачественного отека и фарингита.

При пастереллезе изменение в лимфатических узлах носит характер диффузного геморрагического воспаления (в отличии от очагового) с некрозом, как это устанавливают при сибирской язве. Бактериологический метод дает возможность провести окончательную дифференциацию этих болезней.

Часты случаи смешенных инфекций, когда сибирская язва осложняется пастереллезом. При этом учитывают то, что при сверхостром течении пастереллеза устанавливают картину сепсиса, но с сильным отеком подкожной клетчатки в области глотки и гортани; при подостром - фибринозную плевропневмонию; при хроническом - кахексию и фибринозно - некротическую плевропневмонию.

Для злокачественного отека характерно развитие сильного отека подкожной и межмышечной клетчатки с образованием газов в области ворот инфекции. В печени, почках, сердце устанавливают некроз, зернистую и вакуольную дистрофию. Микроскопическим исследованием мазков, приготовленных из отечных мест, обнаруживают споры, которые никогда не выявляют при сибирской язве. Решающее значение в дифференциальной диагностике сибирской язвы отводится бактериологическим исследованиям.

Причина фарингитов - усиление патогенного действия условно-патогенной микрофлоры при снижении резистентности животных вследствие общего или местного переохлаждения. Иногда фарингиты возникают при действии механических, термических и других раздражителей. Дифференциацию этих болезней осуществляют по результатам клинического и бактериологического исследований.

Лечение при сибирской язве. Для специфического лечения и пассивной иммунизации используют при сибирской язве гипериммунную сыворотку. Получают ее на лошадях или крупном рогатом скоте. Вначале продуцентов иммунизируют вакциной СТИ или ГНКИ, а затем гипериммунизируют в возрастающих дозах вирулентной культурой У-6 штаммов сибирской язвы. Штаммы культур должны быть выделены от разных видов животных, павших от сибирской язвы.

После гипериммунизации от продуцентов берут кровь, от которой отделяют сыворотку. Кровь берут через 8-10 дней после гипериммунизации. От каждого животного берут от 6 до 10 л крови, в зависимости от массы животного. Полученную сыворотку консервируют фенолом (0,5%).

Сыворотку проверяют на стерильность (путем посева на питательные среды), на безвредность - путем прививок ее белым мышам и морским свинкам и на активность - на кроликах.

Сыворотка считается пригодной к применению при условии:

- если в течение 10 дней посевы ее на питательные Среды не дадут роста;

- останутся живыми все белые мыши и морские свинки;

- из 6-ти привитых сывороткой, а затем зараженных вирулентной куль- турой кроликов, выживет не менее трех.

Сыворотка высокой активности, безвредности и активности может использоваться для людей.

Дозы гипериммунной сыворотки для лечения больных животных:

- крупному рогатому скоту - 100-200 мл;

- мелкому рогатому скоту, свиньям, телятам - 50-100 мл.

Сыворотку вводят внутримышечно. При применении гипериммунной сыворотки животным возможно возникновение анафилактического шока. Для предупреждения этого негативного явления животным предварительно вводят 0,1-1 мл сыворотки, а затем, через 15-30 минут, вводят ее оставшееся количество до полной дозы. Если состояние животного не улучшается - через 12 часов сыворотку вводят повторно. В тяжелых случаях сыворотку можно вводить внутривенно.

Лучший эффект достигается при сочетанном применении гипериммунной сыворотки и антибиотиков.

Чаще всего применяют пенициллин по 5-10 тыс. на 1 кг массы 3 раза в день через 4 часа 3-4 дня подряд.

Рекомендуется при сибирской язве комбинированная антибиотикотерапия. Комбинированное использование антибиотиков с различным механизмом действия препятствует образованию в организме устойчивых форм возбудителя сибирской язвы, позволяет уменьшить дозы входящих в сочетания антибиотиков, что способствует более эффективному использованию имеющихся антибиотиков, снижению токсичности и материальных затрат от их применения.

Для комбинированного применения рекомендуется тетрациклин, стрептомицин, эритромицин, ампициллин, которые вводят в половинной суточной дозе. Сочетания указанных антибиотиков и их дозы приводятся в таблице № 1

Таблица 1

Схема комплексного применения антибиотиков

при лечении крупного рогатого скота, больного сибирской язвой

№ схемы

Сочетание антибиотиков

Крупный рогатый скот

взрослый

молодняк до 6 мес.

однократно

двукратно

Однократно

двукратно

1.

Тетрациклин

стрептомицин

10,0

3,0

15,0

1,5

20,0

5,0

10,0

2,5

2.

Тетрациклин

+

ампициллин

10,0

6,0

5,0

3,0

20,0

10,0

10,0

5,0

3.

Тетрациклин

+

эритромицин

10,0

4,0

5,0

2,0

20,0

6,0

10,0

3,0

Для лечения животных, больных и подозрительных по заболеванию сибирской язвой, сочетания антибиотиков применяют внутримышечно в течение 7-10 дней, исходя из показателей состояния здоровья животных.

С профилактической целью сочетания антибиотиков необходимо применять в течение 5-7 дней. Их вводят так же, как и при лечении животных.

Эффективен при сибирской язве Байтрил. Он является антибиотиком гиразы и местом “атаки” его является бактериальная дезоксирибонуклеиновая кислота. Выпускается в виде 2,5%, 5% и 10%-ных растворов. В виде 2,5%-ного раствора применяют внутрь телятам, в виде 5% и 10%-ного - для инъекций. Препарат вводят в дозе 2,5 мг\кг или 5 мг\кг при тяжелых случаях, крупному рогатому скоту - подкожно, телятам - внутримышечно в течение 1-3 дней.

Для лечения людей, инфицированных возбудителем сибирской язвы, в США в 2001 году использовался комплексный антибиотик СИПРО.

Специфическая профилактика сибирской язвы у животных. В результате естественного переболевания животных сибирской язвой у животных создается стойкий продолжительный иммунитет.

Для создания пассивного искусственного иммунитета используется гипериммунная сыворотка, которую вводят в половинных дозах. Иммунитет наступает сразу после введения сыворотки и продолжается до 10-14 дней.

Первые попытки получить биопрепараты для активной специфической профилактики были сделаны Chauveau и Toussaint в 1880 году. Для иммунизации животных они вводили им малые дозы крови, содержащей возбудителя сибирской язвы, а также использовали кровь после температурной обработки или прибавления к ней небольшого количества карболовой кислоты. Однако указанные способы иммунизации не получили применения.

Первые сибиреязвенные штаммы для вакцинации животных были предложены Л. Пастером в 1881 году во Франции.

Первая вакцина им была получена в результате 15-20 - суточного культивирования возбудителя сибирской язвы на МПБ при температуре +42,50 С. Выращенная при таких условиях культура не убивала ни кроликов, ни взрослых морских свинок, но гибли мыши и молодые морские свинки.

Вторая вакцина Л. Пастера была получена после 10-12-дневного культивирования сибиреязвенного микроба при температуре +42,5-430 С на МПБ. Зараженные ею морские свинки и мыши, а также часть кроликов погибали, у овец она вызывала лихорадочное состояние.

Для закрепления достигнутой степени ослабления вирулентности вакцин Пастер переводил бациллярную форму возбудителя в споровую путем помещения вакцин в термостат при температуре +350 С.

В России аналогичную вакцину двух вариантов получил в 1882 г. Л.С. Ценковский, способ получения которой не имел принципиального отличия от вакцины Л. Пастера.

Для создания иммунитета животным в начале вводили первую, затем вторую вакцину. Иммунитет сохранялся более года. В последующем стали применять только вторую вакцину.

Вакцины Л. Пастера, Л.С. Ценковского и др. представляли собой ослабленные (аттенуированные) варианты капсульных вирулентных форм возбудителя сибирской язвы. Их следовало вводить двукратно, они часто вызывали сильные поствакцинальные осложнения, так как бациллы, из которых готовили вакцины, обладали остаточной вирулентностью.

В связи с установлением роли капсульной субстанции в вирулентности сибиреязвенной бациллы, исследователи, при создании сибиреязвенных вакцин, шли по пути выделения и отбора бескапсульного варианта соответствующего возбудителя.

В 1915 г. Rail обнаружил, что при выращивании возбудителя сибирской язвы на сывороточной среде образуются отдельные бациллы без капсулы. После 25-кратного пересева на указанных средах эти бациллы теряли свойства образовывать капсулы не только при росте на питательных средах, но и в организме животных.

Бескапсульный штамм сибиреязвенного микроба получил также Stomatin (1934) путем выращивания бацилл на свернувшейся дефибринированной крови лошади. Полученные им бескапсульные штаммы были слабовирулентными и не образовывали на месте введения отеки. Один из выделенных штаммов (1190-R) был использован для приготовления вакцины, которую с 1938 года успешно применяли в Румынии для прививок овец, а с 1950 года и других видов животных.

Sterne (1937), выращивая бациллы сибирской язвы на 50%-ном сывороточном агаре в присутствии СО2 (65%), получил бескапсульный иммуногенный штамм 34F2, который был предложен для приготовления сибиреязвенной вакцины. Эту вакцину применяют с профилактической целью во многих странах мира.

В 1940 году Н.Н. Гинсбург в СССР создал высокоиммуногенную и практически ареактогенную для животных и людей споровую живую вакцину против сибирской язвы. Он, используя метод рассева на чашках со свернувшейся нормальной лошадиной сывороткой, получил из вирулентной культуры штамма “Красная Нива” вакцинный бескапсульный мутант СТИ (название штамма СТИ связано с Санитарно-техническим институтом, в котором он был получен), который оказался безвредным и иммуногенным для животных и людей. Вакцину, изготовленную из этого штамма, применяют с 1942 года.

Проверка штамма СТИ (Н.Н. Гинсбург, Р.А. Салтыков, В.Р. Архипова, 1964) в условиях 18-летнего хранения в сухом виде и 20-летнего использования в производстве позволила констатировать высокую стабильность его биологических свойств.

В 1946-1949 гг. С.Г. Колесов, Н.А. Михайлов и Ю.Ф. Борисович, применив метод перемежающих пересевов на свернувшуюся нормальную лошадиную сыворотку и беспептонный агар вирулентного штамма Шуя-2, выделенного в 1933 г. из трупа свиньи, получил из него слабовирулентный бескапсульный вариант Шуя-15, который при проверке на лабораторных животных оказался безвредным и иммуногенным.

В 1951-52 гг. С.Г. Колесов и Ю.Ф. Борисович изготовили из указанного штамма с добавлением глицерина и гидроокиси алюминия вакцину ГНКИ. В 1960 г. разработан метод изготовления сухих сибиреязвенных вакцин СТИ и ГНКИ.

Другим направлением разработки средств специфической профилактики у людей является создание вакцины из сибиреязвенного протективного антигена.

Еще в 1904 г. Ball доказал перспективность этого направления, установив, что стерильная сибиреязвенная отечная жидкость может служить иммуногенным фактором.

На основе протективного антигена в США создана противосибиреязвенная вакцина, которую применяют для иммунизации людей. В отличии от живых сибиреязвенных вакцин химическая вакцина ареактогенна и безопасна. Для ее получения используют синтетическую питательную среду, включающую 17 аминокислот, витамины, глюкозу, минеральное масло. Однако вакцина имеет ряд недостатков, основными из которых являются: небольшая длительность иммунитета (до 6 мес.) и возникновение аллергических реакций при ее многократном применении. В ветеринарной практике химические вакцины против сибирской язвы не используются.

В бывших странах СНГ, в том числе и Республике Беларусь, специфическую профилактику сибирской язвы у животных осуществляли преимущественно путем применения вакцины СТИ. Это позволило значительно снизить количество ежегодных вспышек болезни и в целом обеспечить достаточную устойчивое эпизоотическое благополучие хозяйств по сибирской язве.

Однако, несмотря на проведение ежегодной профилактической вакцинации сельскохозяйственных животных, полностью предотвратить заболевание скота сибирской язвой не удалось. Кроме этого, в отдельных случаях отмечалось заболевание молодняка и взрослых животных через 6-10 мес. после иммунизации, что связано с недостаточно напряженным иммунитетом. Было установлено, что через 6 мес. после иммунизации данной вакциной напряженность иммунитета снижается (через 6 мес. выжило 90%, а через 10 мес - 80% экспериментально зараженных животных. Поэтому с 1982 года в стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктах была введена двукратная (весной и осенью) прививка вакциной СТИ.

Двукратная вакцинация животных потребовала значительного увеличения материальных и трудовых затрат. В связи с этим была поставлена задача разработать более эффективную вакцину против сибирской язвы, обеспечивающую образование у привитых животных напряженного иммунитета не менее одного года. Такая вакцина была создана во ВНИИВВ и М на основе ослабленного штамма 55.

Сибиреязвенный штамм 55 обладает высокой иммуногенностью, слабой вирулентностью, образует у привитых животных более напряженный иммунитет, чем вакцина из штамма СТИ. Кроме того, он не обладает реверсибельностью при проведении прямых пассажей на чувствительных животных и перемежающихся пассажах на животных и питательных средах. Максимальный срок персистирования штамма 55 в организме лабораторных и сельскохозяйственных животных при введении в дозе 106-1010 спор, в зависимости от вида, не превышает 14 дней. Это обстоятельство следует учитывать при дифференциации поствакцинальных осложнений от истинного заболевания животных сибирской язвой.

В настоящее время в Республике Беларусь для специфической профилактики сибирской язвы у животных используют “Вакцину против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВ и М”, утвержденную Депортаментом ветеринарии России 18 марта 1997 г.

studfiles.net

Отбор проб грубых и сочных кормов.

Только при правильном отборе проб кормов можно получить достоверные результаты лабораторных исследований. Рекомендуется формировать смешанную пробу, которая содержит различные слои корма. Для сухих кормов количество корма в пробе должно составлять около 0,5 кг, для сочных кормов – минимум 1 кг. Отбор проб проводят согласно нормативной документации: ГОСТ Р ИСО 6497-2011 «Корма для животных. Отбор проб»; ГОСТ Р 55452-2013 «Сено и сенаж. Технические условия».

Взятие средней пробы сена. Среднюю пробу сена, закладываемого на хранение в хозяйствах, отбирают по окончании его заготовки, но не раннее 30 суток после закладки в стога, скирды, сараи, ангары. Разовые пробы из непрессованного сена по 200-250г с каждого места отбирают вручную или пробоотборником от партии массой до 25 тонн - 20 проб, и от каждых последующих 5 тонн - 4 пробы. От партии прессованного сена до 15 тонн отбирают 3% тюков (не менее 5 тюков), массой 15-50 тонн - 1 % тюков (не менее 15 тюков). Разовые пробы отбирают с каждого тюка по одному пласту: из 1-го - поверхностный, из 2-го - последующий и т.д. Исходный образец должен быть не менее 5кг. Из исходного образца, разложенного тонким слоем на ровной поверхности размером 2х2м, отбирают среднюю пробу из 10-ти различных мест по 100г, которая в общем должна составлять не менее 1 кг. Образец, направляемый в лабораторию, должен быть сухим. После чего среднюю пробу осторожно упаковывают в плотную бумагу или полиэтиленовый мешок (сверток должен быть длинным, не короче 50 см) и с сопроводительном документом отправляют в лабораторию. В образец вкладывают этикетку с указанием происхождения сена, номера участка, даты стогования и взятия образца, веса партии. Взятие средней пробы силоса и сенажа. Пробы силоса и сенажа берут из башен, ям, траншей через 4 недели после закладки на хранение по окончании процесса консервирования, но не позднее, чем за 10 дней до начала скармливания. Из траншей пробы корма отбирают на глубине не менее 2м, при этом для анализа не включают верхний 20 см слой. Пробы берут вручную или механическим пробоотборником ПС-1. Вначале отбирают три разовые пробы корма: первую - в центре одной из торцевых сторон на расстоянии 5 м от нее; вторую - в траншеях с прямыми стенами на расстоянии 0,5 м, а с наклонными стенами - на расстоянии 1 м от одной из стен в средней части по длине траншеи; третью - в центре траншеи. Из башен пробы отбирают вначале из верхнего 2-х метрового слоя, после его выемки из оставшейся части на глубине не менее 2м. Разовые пробы берут: первую - в центре башни, вторую - на расстоянии 2м, третью на расстоянии 0,5м от стен башни. Масса каждой пробы должна быть около 5кг. Из исходного образца методом квадрата отбирают среднюю пробу массой не менее 2кг. Пробы сочных кормов (силос, зеленая масса и т.д.) необходимо упаковывать в пластиковые мешки из-за их высокой влажности, при этом необходимо максимально удалить воздух из пакета, а сам пакет закрыть таким образом, чтобы туда не попадал воздух.  Допускается хранение средней пробы в холодильнике в течение 24 часов с момента поступления в лабораторию. Жидкие корма (барду, дробину) берут после тщательного перемешивания и посылают в чистых стеклянных банках, на которые наклеивают этикетку с характеристикой посылаемого корма. Проба доставляется в лабораторию в кратчайшие сроки с соблюдением режимов хранения. При необходимости для этого можно использовать контейнеры с охлаждением и  контролем температуры, которые позволяют определять  температурный режим при хранении и транспортировке. Одну среднюю пробу (весом 1 кг) направляют в лабораторию, а другую хранят на случай арбитражного анализа.Результаты анализа полностью зависят от качества образца. Важно, чтобы каждый образец позволял получить представление обо всей партии в целом, и чтобы его химические, физические и биологические свойства при транспортировке в лабораторию оставались неизменными.Специалисты ФГБУ «Центральная научно-производственная ветеринарная радиологическая лаборатория» могут оказать помощь в проведении отбора проб кормов, а также провести исследование кормов на показатели качества и безопасности, подробности можно уточнить по телефону (3852) 63-34-08.

www.fgu-radiovetlab.ru


Смотрите также